SPÔSOB STANOVENIA KRVNÝCH SKUPÍN

STANOVENIE KRVNEJ SKUPINY SYSTÉMOM AVO

PLAZMOVÉ ANTIGÉNY

Plazmatické (sérové) antigény sú špecifické komplexy aminokyselín alebo sacharidov na povrchu molekúl bielkovín v krvnej plazme (sére)..

KONCEPCIA KRVNEJ SKUPINY

KRVNÁ SKUPINA je kombináciou normálnych imunologických a genetických vlastností krvi, ktorá je dedične podmienená a je biologickou vlastnosťou každého jedinca..

Krvné skupiny sa dedia, tvoria sa po 3-4 mesiacoch vnútromaternicového vývoja a zostávajú nezmenené po celý život. Predpokladá sa, že u ľudí krvná skupina obsahuje niekoľko desiatok antigénov v rôznych kombináciách. Týchto kombinácií - krvných skupín - môže byť v skutočnosti niekoľko miliárd. Prakticky sú rovnaké iba u identických dvojčiat s rovnakým genotypom..

V praktickom lekárstve pojem „krvná skupina“ spravidla odráža kombináciu erytrocytových antigénov systému ABO a Rh faktora a zodpovedajúcich protilátok v krvnom sére..

Pre každý známy antigén boli nájdené protilátky s rovnakým názvom (anti-A, anti-B, anti-rhesus, anti-Kell atď.). Skupinové protilátky v krvi nie sú takou stálou vlastnosťou ľudského tela ako antigény. Iba v systéme skupín ABO sú protilátky normálnou vrodenou vlastnosťou krvnej plazmy. Tieto protilátky (aglutiníny a a b) sú neustále prítomné v ľudskej krvnej plazme..

1. KRVNÉ SKUPINY PODĽA SYSTÉMU AVO

Pojem „kompatibilita“ znamená kombináciu krvi darcu a príjemcu pre antigény a protilátky, ktorá nespôsobuje imunologické interakcie..

V závislosti na prítomnosti aglutinogénov A a B v erytrocytoch a v sére zodpovedajúcich aglutinínov a a b sú všetci ľudia rozdelení do štyroch skupín:

• Skupina O (I) - v erytrocytoch nie sú žiadne aglutinogény, v sére aglutiníny aab.

• Skupina A (II) - aglutinogén A v erytrocytoch, aglutinín b v sére.

• Skupina B (III) - aglutinogén B v erytrocytoch, aglutinín a v sére.

• Skupina AB (IV) - aglutinogény A a B v erytrocytoch, bez aglutinínov v sére.

Antigén A nie je homogénny, existujú dva hlavné podtypy: Podľa toho má skupina A (II) dve podskupiny A (P) a A2 (II) a skupina AB (IV) - AB (IV) a A2B (IV).

Antigén skupiny B je homogénnejší, aj keď už boli opísané zriedkavé varianty. To však nemá významný klinický význam..

Skupina patriaca do krvi podľa systému ABO sa stanoví pomocou aglutinačnej reakcie. V súčasnosti sa na stanovenie krvných skupín podľa systému ABO používajú tri metódy:

• podľa štandardných izohemaglutinujúcich sér,

• podľa štandardných izohemaglutinujúcich sér a štandardných erytrocytov (krížová metóda),

• použitie monoklonálnych protilátok (anti-A a aiti-B tsoliclones).

Počas rutinného vyšetrenia určí nemocničný lekár krvnú skupinu pomocou štandardných izohemaglutinačných sér alebo pomocou tsolikónov. Potom odošle krv do sérologického laboratória na kontrolu skupiny krížovou metódou.

Krvná skupina sa považuje za určenú, až keď laboratórium potvrdí údaje získané nemocničným lekárom. Ak sa výsledky výskumu navzájom líšia, mali by sa obidve štúdie zopakovať..

V prípade núdze (v prípade krvácania je nutná urgentná transfúzia krvi) si nemocničný lekár určí skupinu sám (v laboratóriu sa vykoná opätovná kontrola, ale až potom).

STANOVENIE KRVNÝCH SKUPÍN ŠTANDARDNÝM ISOGEMAGLUTINAČNÝM SÉROM

Najčastejšie v klinickej a laboratórnej praxi.

Podstatou metódy je detekcia antigénov skupiny A a B v testovanej krvi pomocou štandardných izohemaglutinačných sér. Vykonáva sa v miestnosti s dobrým osvetlením pri teplote 15-25 ° С..

a) Potrebné vybavenie

• Štandardné izohemaglutinačné séra skupín O (I), A (II), B (III) a AB (IV) v dvoch rôznych sériách. Sérum by malo byť priehľadné bez známok rozpadu. Pre väčšie pohodlie sú štandardné hemaglutinačné séra rôznych skupín tónované v špecifickej farbe: O (I) - bezfarebná (sivá), A (II) - modrá, B (III) - červená, AB (IV) - jasne žltá. Je potrebné poznamenať, že tieto farby sprevádzajú všetky štítky na krvných produktoch, ktoré majú príslušnú skupinu (krv, erytrocytová hmota, plazma atď.).

• Biele porcelánové alebo smaltované taniere alebo akékoľvek iné taniere so zvlhčeným povrchom, označené 0 (1), A (P), H (W), AB (IV).

• Izotonický roztok chloridu sodného.

• Ihly, pipety, sklenené tyčinky (diapozitívy).

b) Technika reakcie

1. Na misku (platňu) naneste štandardné izohemaglutinačné séra skupín I, II, III v objeme 0,1 ml (jedna veľká kvapka s priemerom asi 1 cm). Aby sa zabránilo chybám, použijú sa dve dávky séra z každej skupiny. Ukázalo sa, že celkovo 6 kvapiek.

2. Šesť kvapiek testovanej krvi približne s veľkosťou špendlíkovej hlavičky 0,01 ml (malá kvapka) sa postupne prevedie suchou sklenenou tyčinkou na misku v 6 bodoch, každá vedľa kvapky štandardného séra (množstvo testovanej krvi by malo byť približne 10-krát menšie ako množstvo štandardného séra). ), potom ich jemne premiešajte pomocou sklenených tyčiniek so zaoblenými hranami.

3. Po zmiešaní plát pravidelne pretrepte.

Aglutinácia začína počas prvých 10 - 30 sekúnd.

4. V tých kvapkách, kde došlo k aglutinácii, pridajte jednu kvapku izotonického roztoku chloridu sodného, ​​potom sa vyhodnotí výsledok reakcie.

Pri pozitívnej reakcii, zvyčajne počas prvých 10 - 30 sekúnd, sa v zmesi objavia malé červené zrná (aglutináty) viditeľné voľným okom, pozostávajúce z lepených erytrocytov..

Ak sú séra všetkých troch skupín pozitívne, znamená to, že testovaná krv obsahuje oba aglutinogény - A aj B a patrí do skupiny AB (IV). Avšak v takýchto prípadoch, aby sa vylúčila nešpecifická aglutinačná reakcia (studená aglutinácia, panglutinácia, alergia), je potrebné vykonať ďalšiu kontrolnú štúdiu testovanej krvi so štandardným izohemaglutinačným sérom skupiny AB (IV), ktorý neobsahuje aglutiníny. Iba absencia aglutinácie v tomto poklese v prítomnosti aglutinácie v kvapkách obsahujúcich štandardné séra skupín 0 (1), A (II) a B (III) nám umožňuje považovať reakciu za špecifickú a analyzovanú krv poslať do skupiny AB0 (Iv).

Je potrebné poznamenať, že v prítomnosti slabého podtypu antigénu A v študovanej krvi začína aglutinačná reakcia s hemaglutinačnými sérami skupín 0 (1) a B (III) neskôr (o 3-4 minúty). Na presné určenie podtypu antigénu A je potrebné vykonať ďalšiu reakciu s takzvaným anti-A činidlom..

STANOVENIE KRVNÝCH SKUPÍN ŠTANDARDNÝM ISOGEMAGLUTINUJÚCIM SÉROVOM A ŠTANDARDNÝMI Erytrocytmi (KRÍŽOVÁ METÓDA)

Metóda sa najčastejšie používa v sérologických laboratóriách. Podstata metódy spočíva v stanovení prítomnosti alebo neprítomnosti skupinových antigénov A a B v študovanej krvi pomocou štandardných izo-hemaglutinačných sér, ako aj skupinových protilátok a a b pomocou štandardných erytrocytov..

• Zariadenie na reakciu so štandardnými erytrocytmi sa líši v tom, že aglutinačná reakcia vyžaduje štandardné erytrocyty troch krvných skupín: 0 (1), A (II), B (III).

• Štandardné erytrocyty sa pripravujú z krvi darcov s predtým známou krvnou skupinou a uchovávajú sa pri teplote 4 - 8 ° C.

Na označenú doštičku s pipetou v šiestich jamkách sa nanesie jedna veľká kvapka séra testovanej krvi zo skúmavky (0,1 ml) a vedľa nich - jedna malá kvapka (0,01 ml) štandardných erytrocytov skupín 0 (1), A (P), V (š) (dve série).

Interpretácia výsledkov reakcie so štandardnými erytrocytmi spočíva v tom, že erytrocyty skupiny 0 (1) sú kontrolné (neobsahujú antigény, čo zásadne znemožňuje špecifickú aglutinačnú reakciu s akýmkoľvek sérom)..

STANOVENIE KRVNÝCH SKUPÍN MONOKLONÁLNYMI PROTILÁTKAMI

Monoklonálne protilátky sa používajú na stanovenie krvnej skupiny, pre ktorú sa používa biotechnológia hybridómov.

Hybridóm je bunkový hybrid tvorený fúziou nádorovej bunky kostnej drene (myelóm) s imunitným lymfocytom, ktorý syntetizuje špecifické monoklonálne protilátky. Hybridóm získava vlastnosti oboch „rodičov“: schopnosť neobmedzeného rastu, charakteristika nádorových buniek a schopnosť syntetizovať protilátky obsiahnuté v imunitnom lymfocyte..

Boli vyvinuté štandardné činidlá - monoklonálne protilátky (MCA): anti-A a anti-B tsolikóny, ktoré sa používajú na stanovenie erytrocytových aglutinogénov. Cyklóny sú lyofilizovaný prášok červenej (anti-A) alebo modrej (anti-B) farby, ktorý sa bezprostredne pred štúdiom zriedi izotonickým roztokom chloridu sodného..

Cyklóny anti-A a anti-B sa nanášajú na bielu platňu v jednej veľkej kvapke (0,1 ml) pod príslušnými nápismi: anti-A alebo anti-B. Jedna malá kvapka (0,01 ml) testovanej krvi sa aplikuje vedľa kvapiek protilátok. Po zmiešaní zložiek sa aglutinačná reakcia sleduje 2 až 3 minúty..

V roku 1940 K. Landsteiner a A. S. Wiener objavili úplne nový antigén v ľudských erytrocytoch, ktorý nazývali Rh faktor (Rh). Rh faktor je prítomný v krvi 85% ľudí a 15% ľudí tento faktor neobsahuje. Je teda pomenovaná po opici Rhesus, ktorá ju vždy má.

Antigény Rhesus sú klasifikované ako lipoproteíny. Sú veľmi aktívne a schopné indukovať tvorbu imunitných protilátok.

Prítomnosť antigénu Rh sa zistí u ľudského plodu od 5-8 týždňov a je dobre vyjadrená v 3-4-mesačnom embryu.

|ďalšia prednáška ==>
KRVNÁ TRANSFÚZIA|METÓDY STANOVENIA FAKTORA RHESU

Dátum pridania: 06.01.2014; Pozretia: 7794; porušenie autorských práv?

Váš názor je pre nás dôležitý! Bol uverejnený materiál užitočný? Áno | Nie

Stanovenie faktora Rh a krvnej skupiny

Koncept krvnej skupiny

Krvná skupina je špecifická sada antigénov a protilátok

Krvná skupina odráža prítomnosť alebo neprítomnosť určitého súboru antigénov a protilátok. Antigény sa nachádzajú na povrchu krvných buniek - erytrocyty, protilátky sú prítomné v krvnej plazme.

Objav charakteristických vlastností krvi patrí Karlovi Landsteinerovi. Rakúsky lekár sa dlhé roky snaží zistiť príčinu závažných komplikácií u niektorých pacientov po transfúzii krvi. Nakoniec sa mu podarilo pochopiť podstatu pomocou experimentu: na príklade 6 vzoriek krvi vedec odhalil fyziologickú reakciu erytrocytov s rôznymi krvnými sérami. Ukázalo sa, že tvarované prvky sa lepia spolu s protilátkami zo séra iných ľudí a dochádza k aglutinácii. Zhlukovanie netvoria samotné erytrocyty, ale antigény na nich umiestnené.

Vďaka Landsteinerovi začala medicína hovoriť o krvných skupinách

Antigén sa nazýva aglutinogén, protilátky proti antigénu sa nazývajú aglutiníny. Podľa princípu väzby aglutinogénov na určité aglutiníny identifikoval Landsteiner 3 krvné skupiny. Jeden z nich sa vyznačoval skutočnosťou, že po pridaní séra nedošlo k adhézii erytrocytov, to znamená, že v ňom neboli žiadne antigény. Za to získala označenie 0 (nula) a ďalšie dva prítomnosťou antigénov A a B. V roku 1900 bol teda založený systém krvných skupín AB0. O niekoľko rokov neskôr Landsteinerovi študenti identifikovali 4. krvnú skupinu, ktorá na rozdiel od predchádzajúcich skupín mala dva antigény naraz - A a B.

Dnes existuje 36 systémov krvných skupín, ale v lekárskej praxi je stále najrozšírenejší a najdôležitejší systém AB0, ako aj Rh faktor, ktorý bol objavený neskôr aj za pomoci Landsteinera..

Aké krvné skupiny existujú podľa systému AB0

ABO krvné skupiny

Systém AB0 má 4 krvné skupiny:

  • 0 (I) - žiadne antigény;
  • A (II) - antigén A;
  • B (III) - antigén B;
  • AB (IV) - antigény A a B.

Antigén je oligosacharidový reťazec spojený s membránovými proteínmi a lipidmi erytrocytov. Antigény A a B sa navzájom líšia iba odlišným koncovým zvyškom oligosacharidu.

Prekurzorom antigénov A a B je antigén H, ktorý je prítomný vo všetkých erytrocytoch. Dedením dieťa dostáva gény od otca a matky, ktoré kódujú molekulárnu štruktúru budúcich antigénov. Gén A kóduje enzým, ktorý vytvára antigén A z časti antigénov H, gén B podporuje tvorbu antigénu B pomocou antigénu H. V krvnej skupine 0 (I) je gén H, a teda antigén H, ale nemá sa s čím viazať, pretože gény A a B chýbajú.

Stručná charakteristika štyroch krvných skupín

Skupinová nekompatibilita vedie k „prilepeniu“ erytrocytov

V každej zo skupín sú okrem antigénov prítomné aj protilátky. Ak sa kombinujú rôzne krvné skupiny, protilátky začnú interagovať s antigénmi, ktoré sa zlepia, zničia erytrocyty, čo vedie k vážnym následkom vrátane smrti. Každá krvná skupina sa vyznačuje prítomnosťou protilátok proti iným skupinám, s výnimkou AB.

  • Skupina 0 je charakterizovaná protilátkami α a β, to znamená, že majitelia tejto skupiny nemôžu brať krv ani A, B, ani AB.
  • Skupina A obsahuje β aglutiníny, čo znamená nekompatibilitu so skupinou B a AB, ale je možné odobrať krv zo skupiny 0.
  • Skupina B sa líši v protilátkach α, nie je kompatibilná so skupinami A a AB, darcovia so skupinou 0 sú vhodní.
  • Skupina AB nemôže mať protilátky proti týmto antigénom, pretože aglutinogény a aglutiníny nemôžu koexistovať v rovnakom organizme, takže všetky skupiny sú vhodné pre majiteľov AB..

Skupina 0 teda môže byť univerzálnym darcom, skupina AB - univerzálnym príjemcom. V súčasnosti však upustili od transfúzie rôznych skupín; transfúzia sa uskutočňuje od darcov tej istej krvnej skupiny, aby sa zabránilo negatívnym následkom..

Každá zo skupín sa môže rozdeliť do podskupín, napríklad antigén A zahrnuje antigény Al, A2, A3 atď., Antigén B obsahuje aj rôzne varianty podskupín. Podskupiny môžu byť zvyčajne dôležité pri určovaní krvnej skupiny. Pred transfúziou sa vykonáva test individuálnej kompatibility, aby sa zabránilo možnému vplyvu variácií podskupín antigénov..

Rh faktor: negatívny a pozitívny

Krvné skupiny môžu byť Rh negatívne alebo Rh pozitívne

Spolu s AB0 má veľký význam systém Rhesus (Rh). Rozdiel v skupinách s rhesusom sa prejavil v 40. rokoch 20. storočia, keď lekári čelili aglutinácii séra pacienta s 3⁄4 vzoriek červených krviniek od darcov, aj keď u niektorých vzoriek došlo k úplnej zhode krvných skupín AB0. Neskôr pod vedením K. Landsteinera objavil a opísal Dr. A. Wiener rovnakú reakciu získanú s krvným sérom opice rhesus, z ktorej pochádza aj názov.

Rh je proteín zo skupiny antigénov nachádzajúcich sa na povrchu erytrocytov. Medzi rôznymi antigénmi, ktoré tvoria systém rhesus, je dominantný antigén D. Preto je jeho prítomnosť rozhodujúca pre pozitívny Rh (Rh +), jeho absencia znamená, že krvný faktor je negatívny (Rh -).

Keď sa Rh pozitívne bunky dostanú do obehového systému s Rh negatívnymi erytrocytmi, vytvárajú sa aloimunitné protilátky. Telo vníma antigén D ako cudzí a snaží sa ho zbaviť. Tento jav sa nazýva Rh-konflikt. Objav systému Rh umožnil vyhnúť sa negatívnym následkom transfúzie a tiež nájsť spôsob, ako pomôcť tehotným ženám, ktoré majú konflikt Rh s plodom, za prítomnosti rôznych faktorov Rh..

Rh sa dedí recesívne-dominantným vzorom, kde (Rh -) je recesívny a (Rh +) je dominantný.

Stanovenie krvnej skupiny

Stanovenie skupiny patriacej metódou aglutinácie

Krvná skupina sa deteguje pomocou aglutinačnej reakcie. Erytrocyty sa kombinujú s fyziologickým roztokom monoklonálnych protilátok, z ktorých každá obsahuje aglutiníny α, β, α a β. Reakciou adhézie s určitými protilátkami sa odhalí zodpovedajúca skupina.

Prvky v tvare skupiny A kombinované s aglutinínmi α.

Skupina B - adhézia nastala v roztoku s protilátkami β.

Skupina AB - aglutinačný proces nebol pozorovaný pri žiadnej z protilátok.

Skupina 0 - erytrocyty prilipli k protilátkam každého roztoku.

Stanovenie faktora Rh

Stanovenie príslušnosti krvi Rh

Na identifikáciu príslušnosti k Rh sa používajú rôzne metódy, najbežnejšie sú testy založené na interakcii erytrocytov so sérom anti-Rhesus v rôznych roztokoch. Kontrolnou vzorkou je zvyčajne anti-rhesus sérum IV krvnej skupiny, to znamená, že neobsahuje antigén D, antigény A a B. Ak dôjde k charakteristickej aglutinačnej reakcii, stanoví sa Rh ako pozitívny.

Môže štúdia preukázať nesprávny výsledok?

Porušenie techniky postupu môže viesť k chybe testu

Skúška môže odrážať skreslené výsledky v nasledujúcich prípadoch:

  1. Porušenie analytickej techniky:
    • Nesprávna teplota.
    • Nesprávny pomer aglutinínov a erytrocytov.
    • Nedostatočný čas na pozorovanie.
    • Chyba v poradí reagencií na doštičke.
    • Zlá kvalita reagencií.
  2. Zložité krvné skupiny a faktor Rh.
    • Ak má napríklad antigén na erytrocytoch nízku schopnosť aglutinácie, predstavuje antigén A podskupina A2.
    • S nešpecifickou adhéziou tvarovaných prvkov, ktorá môže byť dôsledkom autoimunitných patológií.
    • Krvné chiméry prispievajú k skresleniu výsledku. Toto je stav, keď sú červené krvinky prítomné v niekoľkých populáciách a antigény patria do rôznych skupín. Môže sa vyskytnúť v dôsledku masívnych transfúzií od darcov skupiny 0 (I) po transplantácii, ale zvyčajne sa pozoruje u heterozygotných dvojčiat..
    • Na aglutinačnú schopnosť erytrocytov majú vplyv rôzne choroby.
    • Niekedy u novorodencov sú aglutinogény slabé, protilátky chýbajú.

Môže sa zmeniť krvná skupina??

Krvná skupina je téma, ktorá nie je úplne pokrytá vedou

Na túto otázku bývala jednoznačná odpoveď „nie“. Ak bola zaregistrovaná iná skupina alebo faktor, výsledky sa pripísali iba laboratórnej chybe. Dnes, keď sa vylepšujú zariadenia a činidlá, je pravdepodobnosť chyby menšia..

Vedci sa začali zaujímať o túto problematiku a začali vyvíjať teórie, ktoré menia myšlienku diferenciácie krvi podľa skupín. Jeden z nich sa rozšíril: ľudská rasa spočiatku predstavuje úplne odlišné druhy, ktoré predtým žili oddelene, bez toho, aby sa navzájom miešali, každý druh mal svoju vlastnú sadu génov.

Keď sa ľudia začali geograficky pohybovať a vytvárať páry, krv nasledujúcich generácií už bola zmiešaná s genómom mestika. Imunitný systém začal produkovať protilátky proti antigénom, ktoré mu neboli známe. Takto vznikli krvné skupiny. Pretože moderní ľudia sú v skutočnosti mestici, majú najrôznejšie kombinácie antigénov, ktoré sa môžu aktivovať pod vplyvom rôznych faktorov (infekcia, tehotenstvo), čo sa prejaví v dôsledku zmeny krvnej skupiny. V skutočnosti mestigový multigén genómu mestica jednoducho prejavuje svoje ďalšie „strany“, to znamená, že spočiatku obsahuje rôzne antigény, ktoré sa v jednom životnom období prejavujú niektorými antigénmi, v inom inými..

Záujem o pôvod krvných skupín neutícha. Nedávno vedci z Vermontu identifikovali 2 nové krvné skupiny, predpokladá sa, že existuje najmenej ďalších 10 skupín, ktoré ešte neboli rozpoznané..

Metódy stanovenia krvnej skupiny

Krvná skupina podľa systému AB0 sa stanoví pomocou aglutinačnej reakcie. V súčasnosti sa na stanovenie krvných skupín podľa systému AB0 používajú tri metódy:

• použitie štandardných izohemaglutinujúcich sér;

• použitie štandardných izohemaglutinačných sér a štandardných erytrocytov (krížová metóda);

• použitie monoklonálnych protilátok (anti-A a anti-B tsoliclones).

Pri určovaní krvnej skupiny existuje nasledujúca spoločná taktika.

Počas rutinného vyšetrenia určí nemocničný lekár krvnú skupinu pomocou štandardných izohemaglutinujúcich sér alebo tsolikónov a potom krv odošle do sérologického laboratória na kontrolu skupiny krížovou metódou..

Krvná skupina sa považuje za definitívnu, iba ak laboratórium potvrdilo údaje získané nemocničným lekárom. Ak sa výsledky štúdií líšia, obidve štúdie by sa mali opakovať..

Ak je potrebné urgentne určiť krvnú skupinu (v prípade krvácania je nutná urgentná transfúzia krvi), určí si nemocničný lekár krvnú skupinu sám (v laboratóriu vykonajú opätovnú kontrolu, ale až potom). V takýchto prípadoch sa tiež používajú reakcie s izohemaglutinačnými sérami (alebo polyklonmi), ale pokiaľ je to možné, odporúča sa použiť krížovú metódu.

Stanovenie krvných skupín pomocou štandardných izohemaglutinačných sér

Táto metóda je v súčasnosti najbežnejšia v klinickej a laboratórnej praxi..

Podstatou metódy je detekcia antigénov skupiny A a B v študovanej krvi pomocou štandardných izohemaglutinačných sér. Na tento účel sa používa aglutinačná reakcia. Reakcia sa uskutočňuje v miestnosti s dobrým osvetlením pri teplote 15-25 ° C.

Potrebné vybavenie

1. Štandardné izohemaglutinačné séra skupín 0 (I), A (II), B (III) a AB (IV) dvoch rôznych sérií. Séra na stanovenie krvných skupín sa vyrábajú v špeciálnych sérologických laboratóriách z darovanej krvi. Séra sa uchovávajú pri teplote 4 - 8 ° C (v chladničke). Dátum exspirácie séra je uvedený na štítku. Titer séra (tiež uvedený na štítku) musí byť najmenej 1:32 (pre sérum B (W) - najmenej 1: 16/32). Titrom séra sa rozumie jeho maximálne zriedenie, pri ktorom môže dôjsť k aglutinačnej reakcii. Sérum by malo byť číre. Pre väčšie pohodlie sú štandardné hemaglutinačné séra rôznych skupín tónované tak, aby mali určitú farbu: 0 (I) - bezfarebná, A (II) - modrá, B (III) - červená, AB (IV) - jasne žltá. Je potrebné poznamenať, že tieto farby sprevádzajú všetky štítky na krvných produktoch, ktoré majú príslušnú skupinu (krv, erytrocytová hmota, plazma atď.).

2. biele porcelánové alebo smaltované taniere alebo akékoľvek iné; doštičky so zvlhčeným povrchom, označené 0 (I), A (P), B (W), AB (IV).

3. Izotonický roztok chloridu sodného.

4. Ihly, pipety, sklenené tyčinky (podložné sklíčka).

Reakčná metóda

1. Pred začatím reakcie podpíšte doštičku (použite meno a iniciály subjektu), po ktorej sa na ňu pod príslušným označením nanesú štandardné izohemaglutinačné séra skupín I, II a III v objeme 0,1 ml (kvapka s priemerom asi 1 cm). Aby sa zabránilo chybám, použijú sa dve série sér z každej zo skupín, pretože jedna zo sérií môže mať nízku aktivitu a neposkytovať zreteľnú aglutináciu. Celkovo sa získa šesť kvapiek, ktoré tvoria dva rady po troch kvapkách v nasledujúcom poradí zľava doprava: 0 (I), A (P), B (W).

2. Krv na výskum sa odoberá z prsta alebo zo žily. Šesť kvapiek testovanej krvi približne veľkosti špendlíkovej hlavičky (0,01 ml, malá kvapka) sa postupne prevedie suchou sklenenou tyčinkou na dosku v šiestich bodoch, každá vedľa kvapky štandardného séra (množstvo testovanej krvi by malo byť približne 10-krát menšie ako množstvo štandardného séra). s ktorými sa zmieša), potom sa opatrne zmiešajú so sklenenými tyčinkami so zaoblenými hranami.

Je možná jednoduchšia technika: jedna veľká kvapka krvi sa nanesie na misku, z ktorej sa odoberie rohom skleneného sklíčka a prenesie sa do každej kvapky séra, pričom sa s ňou jemne premieša. Zároveň zakaždým, keď sa krv odoberá s novým rohom pohára, dbajte na to, aby sa kvapky nezlúčili.

3. Po zmiešaní plát pravidelne pretrepte.

Aglutinácia začína počas prvých 10 - 30 s, avšak pozorovanie by sa malo vykonávať až 5 minút kvôli možnosti neskoršej aglutinácie, napríklad pri erytrocytoch skupiny A.2(II).

4. V tých kvapkách, kde došlo k aglutinácii, pridajte jednu kvapku izotonického roztoku chloridu sodného, ​​potom sa vyhodnotí výsledok reakcie.

Interpretácia výsledkov

Aglutinačný test môže byť pozitívny alebo negatívny. Pri pozitívnej reakcii, zvyčajne počas prvých 10 - 30 sekúnd, sa v zmesi objavia malé červené zrná (aglutináty), pozostávajúce z nalepených erytrocytov, ktoré sú viditeľné voľným okom. Malé zrná sa postupne spájajú do väčších a niekedy do nepravidelných vločiek. V takom prípade je sérum čiastočne alebo úplne sfarbené. Pozitívna reakcia môže byť piesková alebo okvetná lístok (obrázok 6-1).

Obrázok: 6-1. Druhy aglutinácie: a - žiadna aglutinácia; b - piesková aglutinácia; c - aglutinácia okvetných lístkov

V prípade negatívnej reakcie zostáva kvapka rovnomerne sfarbená do červena, nenájdu sa v nej žiadne zrná (aglutináty).

Výsledky reakcií po kvapkách so sérami tej istej skupiny (dve série) by mali byť rovnaké.

Príslušnosť krvi, ktorá sa má vyšetrovať, do príslušnej skupiny sa určuje podľa prítomnosti alebo neprítomnosti aglutinácie počas reakcie so zodpovedajúcim sérom po pozorovaní po dobu 5 minút (tabuľka 6-2)..

Je potrebné poznamenať, že ak séra všetkých troch skupín poskytli pozitívnu reakciu, znamená to, že testovaná krv obsahuje oba aglutinogény (A a B) a patrí do skupiny AB (IV). V takýchto prípadoch je však potrebné vylúčiť nešpecifickú aglutinačnú reakciu a vykonať ďalšiu kontrolnú štúdiu testovanej krvi so štandardným izohemaglutinačným sérom skupiny AB (IV), ktorý neobsahuje aglutiníny. Iba absencia aglutinácie v tomto poklese v prítomnosti aglutinácie v kvapkách obsahujúcich štandardné séra skupín 0 (I), A (II) a B (III) nám umožňuje považovať reakciu za špecifickú a dať študovanú krv do skupiny AB0(Iv).

Tabuľka 6-2. Vyhodnotenie výsledkov reakcie so štandardnými izohemaglutinačnými sérami

Je potrebné poznamenať, že v prítomnosti slabého antigénu A2 aglutinačná reakcia s hemaglutinačnými sérami skupín 0 (I) a B (III) začína neskôr (o 3-4 minúty).

Identifikácia podskupín antigénu A sa vykonáva v sérologickom laboratóriu pomocou špeciálnych extraktov zo semien rastlín Dolichos biflorus a Ulex Europeus. Prvý z nich aglutinuje erytrocyty s antigénom A1, ale nereaguje s antigénom A2, a druhá je naopak.

Stanovenie krvných skupín krížovým spôsobom

Metóda sa najčastejšie používa v sérologických laboratóriách. Podstata metódy spočíva v stanovení prítomnosti alebo neprítomnosti skupinových antigénov A a B v študovanej krvi pomocou štandardných izohemaglutinujúcich sér, ako aj skupinových protilátok α a β pomocou štandardných erytrocytov. Reakcia so štandardnými sérami sa uskutočňuje ako je opísané vyššie..

Reakcia so štandardnými erytrocytmi sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom.

Potrebné vybavenie

Zariadenie na reakciu so štandardnými erytrocytmi sa líši v tom, že vyžaduje štandardné erytrocyty troch krvných skupín: 0 (I), A (II), B (III). Štandardné erytrocyty sa pripravujú z krvi darcov s predtým známou krvnou skupinou a uchovávajú sa pri teplote 4 - 8 ° C. Čas použiteľnosti 2-3 dni.

Reakčná metóda

1. Krv na výskum sa odoberie z žily do suchej skúmavky, odstredí sa alebo sa nechá stáť 20 - 30 minút sama, aby sa získalo sérum..

2. Na označenú doštičku pipetou naneste tri veľké kvapky (0,1 ml) séra testovanej krvi zo skúmavky a vedľa nich - jednu malú kvapku (0,01 ml) štandardných erytrocytov skupín.

3. Ďalšie opatrenia sa uskutočňujú podobne ako pri použití štandardného izohemaglutinačného séra: zodpovedajúce kvapky sa zmiešajú so sklenenými tyčinkami, tableta sa pretrepáva, pozoruje sa 5 minút, ku kvapkám sa pridá izotonický roztok chloridu sodného s aglutináciou a potom sa vyhodnotí výsledok..

Tabuľka 6-3. Vyhodnotenie výsledkov stanovenia krvnej skupiny krížovou metódou

Interpretácia výsledkov

Vyhodnoťte údaje získané v obidvoch reakciách (so štandardnými izohemaglutinujúcimi sérami a štandardnými erytrocytmi - tabuľka 6-3)..

Zvláštnosť interpretácie výsledkov reakcie so štandardnými erytrocytmi - erytrocyty skupiny 0 (I) sa považujú za kontrolu (neobsahujú antigény, čo zásadne znemožňuje špecifickú aglutinačnú reakciu s akýmkoľvek sérom).

Výsledok krížovej metódy sa považuje za spoľahlivý, iba ak sa pri hodnotení výsledkov reakcie so štandardnými izohemaglutinačnými sérami a so štandardnými erytrocytmi zhodujú odpovede na skupinu študovanej krvi. Ak sa tak nestane, obe reakcie by sa mali prerobiť.

Dátum pridania: 2015-01-19; videnia: 429; porušenie autorských práv

Metódy stanovenia krvných skupín, popis tabuľky

Takmer každý človek aspoň raz v živote absolvoval test na zistenie krvnej skupiny. Ďalej sa bude diskutovať o metódach tejto analýzy a ich spoľahlivosti..

Na čo slúži diagnóza??

Krvná skupina je špecifická séria antigénov umiestnených na povrchu červených krviniek, ktoré určujú ich špecifickosť. Je známych veľa takýchto antigénov, a preto bola prijatá jednotná klasifikácia krvi podľa ABO a Rh faktora..

Tento indikátor je nevyhnutne stanovený u pacientov pred chirurgickým zákrokom, vojenských, policajných a iných kategórií ľudí, ktorí môžu vyžadovať urgentnú transfúziu krvi.

Štandardná metóda stanovenia krvi

Najbežnejšou metódou na štúdium tohto indikátora je metóda využívajúca štandardné sérum. Táto diagnóza určuje bežné antigény systémom ABO.

Izohemaglutinačné sérum je kombináciou špeciálnych protilátok proti vonkajším časticiam erytrocytov. Ak sa nájde kompatibilný antigén, ktorý môže byť ovplyvnený protilátkami, vytvorí sa komplex, ktorý podporuje nástup imunitno-ochranného mechanizmu. Vďaka tomu sa erytrocytové krvinky zlepujú (aglutinácia). Ak sa to stane, dôjde sa k záveru, že krv je nekompatibilná..

Tieto séra sa vyrábajú z krvi darcov podľa špeciálneho systému, ktorý znamená extrakciu plazmy, v ktorej obsahuje protilátky, a potom sa zriedi izotonickým chloridom sodným, a to v niekoľkých fázach:

  • Do nádoby sa naleje 1 ml vody, v ktorej sa rozpustí 0,9% kuchynskej soli.
  • Rovnaké množstvo zriedenej plazmy sa pridá do tej istej skúmavky..
  • Potom sa 1 ml tejto kvapaliny vleje do izotonickej nádoby.

Tento proces produkuje pomer 1: 256. Ak dôjde k porušeniu metódy riedenia, je vysoká pravdepodobnosť, že získate chybné výsledky..

Vykonávanie výskumu

0,1 ml každého séra sa nanesie na povrch doštičky v oblasti, kde sa nanáša požadovaná značka. Potom sa pre každú vzorku odoberie testovacia krv 0,01 ml. A potom sa každá kvapka séra zmieša s krvou.

Po piatich minútach sa stanoví diagnóza. Testovanie sa považuje za pozitívne, ak aglutinačná reakcia prešla. Na základe výsledkov analýz je zostavená tabuľka, do ktorej sa vstupujú..

Tabuľka výsledkov testov krvných skupín s použitím štandardných sér.

Technika krížovej reakcie

V tomto prípade sa na stanovenie aglutinogénu použijú tsololóny. Inak štandardné séra s technológiou paralelného testu vďaka referenčným bunkám erytrocytov.

Tieto dve metódy sú si navzájom veľmi podobné. Stále však existujú rozdiely.

Malá kvapka bežných erytrocytov sa aplikuje na povrch, na ktorý sa predtým nanášajú rôzne séra. Potom sa krv pomocou centrifúgy rozdelí na frakcie. A tvarované prvky sa pridajú do štandardných sér a plazmatická časť sa pridá do štandardných buniek erytrocytov. Vyhodnotenie výsledkov sa uskutoční po piatich minútach a ukazovatele sú uvedené v tabuľke.

Vďaka tejto technike sú eliminované chyby v štúdiu..

Metóda využívajúca tsolikóny

Ak nie je možné určiť krvnú skupinu pomocou štandardných sér, použite túto techniku.

Tsoliklons - hybridné protilátky získané z krvných B-lymfocytov myší.

Postupnosť diagnostiky je nasledovná:

  1. Po vytvorení značiek na doštičke, ktoré zodpovedajú typu tsoliclonu, sa aplikuje roztok.
  2. Do každej vzorky tsoliclonu sa pridá jedna kvapka diagnostikovanej krvi.
  3. Vyhodnotenie výsledkov za päť minút.
  4. Pri tejto technike je potrebné dodržiavať špeciálne podmienky. Patria sem vhodnosť cyklónov, teplota miestnosti a vlhkosť.

Výsledky testu sa považujú za pozitívne, ak sa pri zmiešaní týchto frakcií pozoruje aglutinačná reakcia. Ak sa to stalo v dvoch vzorkách, potom sa usudzuje, že krv patrí do štvrtej skupiny. Ak sa reakcia nepozoruje vôbec, potom na prvú. Diagnostické chyby v tejto technike nie sú bežné..

Rýchla cesta „Erythrotest“

Vyššie uvedené metódy sa v medicíne používajú už dlho a sú rozšírené po celom svete. Ale vzhľadom na skutočnosť, že priemysel sa neustále vyvíja, sa zavádzajú rýchle diagnostické metódy na zistenie príslušnosti ku krvnej skupine. Erythrotest sa považuje za takúto inováciu..

Na stanovenie indikátora týmto spôsobom musíte mať nasledujúce vybavenie:

  • 5-jamková štandardná platňa
  • Vertikutátor na prepichnutie a príjem biologickej tekutiny
  • Sklenená pipeta s gumovou žiarovkou
  • Pipetou nasajte reagencie
  • Miešacie tyčinky

Hlavnou výhodou erytrotestu je, že štúdia nevyžaduje ďalšie podmienky a je k dispozícii v čase, keď nie je možná štandardná diagnostika..
Postupnosť vykonávania
Vo výklenkoch tablety sú tsololóny umiestnené na antigény povrchového typu a hlavný, ktorý je zodpovedný za dedičný prenos Rh faktora. Do poslednej jamky sa pridá kontrolné sérum, ktoré vylúči chybný výsledok a správne indikuje príslušnosť k jednej alebo inej skupine..

Vyhodnotenie výsledkov analýzy sa uskutočňuje pomocou tabuľky, ktorá ukazuje možné výsledky skúšky.

ABO klasifikácia

Krvná skupina, jej stanovenie sa vykonáva na základe špeciálne vyvinutých štandardov. Existuje osobitná tabuľka, ktorá charakterizuje každú krvnú skupinu..

Stanovenie krvnej skupiny

V roku 1901 významný vedec Karl Landsteiner objavil krvné skupiny a položil základ modernej transfuziológie. Vedec identifikoval tri skupiny na základe rôznych variantov aglutinačnej reakcie erytrocytov a krvného séra. Materiál na štúdium bol prevzatý od zamestnancov nášho vlastného laboratória. Landsteinerovci Decastello a Sturley objavili štvrtú skupinu o niekoľko rokov neskôr, ale považovali ju za pochybnú a vylúčenú z výsledkov výskumu. V roku 1906 pražský psychiater Jan Janski potvrdil existenciu skupiny AB (IV). Zverejnenie štúdie v miestnej publikácii zostalo takmer bez povšimnutia. V roku 1910, po opätovnom objave štvrtej skupiny Mossom, bol Jan Jansky prinútený dokázať nadradenosť tohto objavu. Český vedec navrhol digitálne označenie krvných skupín: I, II, III, IV.

V transfúznej medicíne sú krvné skupiny rôznymi kombináciami antigénov erytrocytov. Antigény sú genetické vlastnosti: dedia sa po rodičoch a po celý život zostávajú nezmenené. V roku 1980 Medzinárodné spoločenstvo pre transfúziu krvi vyvinulo numerickú terminológiu pre antigény červených krviniek. Vyhradených 23 systémov krvných skupín, vrátane 194 antigénov. Číslovanie vo väčšine prípadov zodpovedá poradiu detekcie. Antigény obsiahnuté v každom z 23 systémov sú kódované šesťmiestnym číslom: prvé tri číslice sú číslo systému, zvyšné tri označujú špecifickosť antigénu v systéme..

Prečítajte si tiež:
  1. B.6.4.1. Spôsoby výberu textu.
  2. III ROZŠÍRENIE SKUPINY A VÝVOJ JEDNOTLIVOSTI
  3. III.2.2) Hlavné skupiny a druhy trestných činov.
  4. Nbsp; 7 Stanovenie podporných reakcií pre skupinu Assur
  5. R Terapeutická dávka laserového žiarenia a metódy jej stanovenia
  6. V. Metódy a metódy dezinfekcie a / alebo zneškodňovania zdravotníckeho odpadu triedy B a C.
  7. V.2. DEFINÍCIE
  8. VII.2.2) Spôsoby nadobudnutia vlastníctva.
  9. XII. Spôsob platby
  10. A keď sa deti podieľajú na tele a krvi, potom ich vzal aj preto, aby smrťou pripravil o moc toho, kto mal moc smrti, teda diabla.
Systém č.názovOznačenieNázov génovChromozomálna lokalizácia
001AB0AB0AB09q34.1-q34.2
002MNSMNSGYPA, GYPB, GYPE4q28-q31
003PP1P122q11.2-qter
004RhRHRHD, RHCE1p36.2-p34
005LuteránskyLULU19q12-q13
006KellKELKEL7q33
007LewisLEFUT319p33
008DuffyFYFY1q22-q23
009KiddJKJK18q11-q12
010DiegoDIAE117q12-q21
011YtYTACHE7q22
012XgXGXGXp22,32
013SciannaSCSC1p36.2-p22
014DombrockDODOneznámy
015ColtonCOAQP17p14
016Landsteiner-WienerĽĽ19p13,2-cen
017Chido / RogersCH / RGC4A, C4B6p21.3
018HhHFUT119q13
019KxXKXKXp21.1
020GerbichGEGYPC2q14-q21
021CromerCROMDAF1q32
022KnopsKNCR11q32
023IndickýINCD4411p13

Systém krvných skupín AB0

Skupinové združenie podľa systému AB0

AglutinogényAglutiníny
0α a β
Aβ
Bα
ABč
  • 0 (I): chýbajú antigény A a B, detekujú sa protilátky α a β (35 - 40% svetovej populácie);
  • A (II): je prítomný antigén A a protilátky β (35%);
  • B (III): Boli zistené aglutinogén B a aglutinín α (15 - 20%);
  • AB (IV): prítomnosť aglutinogénov A a B, absencia aglutinínov α a β (5 - 10%).

Pri postupe zo západu na východ Eurázie sa miera detekcie antigénu A znižuje a antigén B sa zvyšuje. Antigén 0 je v Ázii zriedkavý, je však rozšírený medzi pôvodnými obyvateľmi Južnej Ameriky, Polynézie a Austrálie. Dôvodom sú epidémie infekčných chorôb.

Výsledok typizácie krvi sa zaznamená v anamnéze alebo na karte darcu. Transfúzny lekár označuje dátum a znaky.

V niektorých prípadoch sa počas typizácie pozoruje mierna aglutinácia erytrocytov. Nedostatočne výrazná reakcia sa vysvetľuje prítomnosťou slabých variantov antigénov A a B. Najväčší klinický význam majú podskupiny A1 a A2. Slabé varianty prvýkrát objavili v roku 1911 vedci Dungern a Hirszeld. Neskôr v roku 1930 Landsteiner a Levine navrhli názvy podskupín - A1 a A2. A2 sa vyskytuje až 20% v skupine A a až 35% v skupine AB. Sérum na tvár zo vzoriek krvi A2 môže obsahovať anti-A1-protilátky: v 2% prípadov v skupine A2 a 30% v A2B. Anti-A protilátky1 sú nebezpečné v dôsledku aglutinácie erytrocytov skupiny A.

Metóda stanovenia krvných skupín2 a A2B

Miera detekcie erytrocytov A2 sa významne líši v závislosti od použitých reagencií. Tu je porovnanie výsledkov výskumu pri použití rôznych metód na stanovenie krvných skupín A.2 a A2B.

  • Anti-A1 (lektín, fytohemaglutinín). Diagnosticum zreteľne (na +++ / ++++) aglutinuje A1 erytrocyty ihneď po zmiešaní so vzorkou. Neaglutinuje A2 alebo spôsobí malú aglutináciu piatu minútu alebo neskôr.
  • Štandardné izohemaglutinačné séra.
  • Anti-A a anti-AB cyklóny.
  • Tsoliklon anti-A slabý.
Analyzované vzorkyKrvná skupina A (II)Krvná skupina AB (IV)
Analyzované vzorkySkupina A2 (II) v%Analyzované vzorkySkupina A2B (IV) v%
Anti-A1 (lektín, fytohemaglutinín)159214.735723.5
Cyklóny: anti-A, anti-AB35992,1 *3577,03 *
Tsoliklon anti-A - slabý35874,5 *35711,2 *
Štandardné izohemaglutinačné séra159217.434434.2

Poznámka: * - aglutinácia je slabá, na ružovom pozadí sú malé aglutináty.

Najvyššiu presnosť výskumu poskytuje Anti-A1 (lektín, fytohemaglutinín). Test sa odporúča na detekciu podskupín antigénu A u detí mladších ako dva roky. Dôvodom je fyziologická nezrelosť erytrocytov novorodencov, ktorá vedie k chybným výsledkom štúdie so štandardnými izohemaglutinujúcimi sérami..

V roku 1930 Landsteiner a Levine objavili podtyp Aint: prechodný variant medzi A1 a A2. Tento antigén je charakteristický pre negroidov a dosahuje 8,5% u jedincov s krvnou skupinou A. U belochov bol Aint pozorovaný iba u 1% ľudí s druhou krvnou skupinou. Vo veľmi zriedkavých prípadoch človeku chýbajú všetky antigény systému AB0. Bombayovský fenotyp je spôsobený genotypom hh. Pri absencii antigénu H sa u osôb tejto kategórie nachádzajú protilátky anti-A a anti-B.

Metóda stanovenia krvných skupín

Algoritmus na stanovenie krvnej skupiny s hemaglutinačnými sérami

Na stanovenie krvnej skupiny AB0 priamou metódou sa používajú dve série štandardných izohemaglutinačných sér. Pripravte si dve dávky séra z troch skupín s titrom 1:32 alebo vyšším. Na odobratie každého séra použite samostatnú označenú pipetu. Pripravte sérum AB (IV) na kontrolu.

  1. Zaistite dobré osvetlenie a teplotu vzduchu 18 - 25 ° C.
  2. Označte štítok: 0 (I) - vľavo, A (II) - stred, B (III) - vpravo. V hornej časti v strede uveďte meno darcu alebo číslo analyzovanej krvi.
  3. Na jamky nanášajte v dvoch radoch podľa označenia na doštičke 1 - 2 kvapky (približne 0,1 ml) séra.
  4. Vložte jednu malú kvapku erytrocytov, ktoré sa majú skúmať, vedľa kvapiek séra pomocou pipety alebo sklenenej tyčinky. Objem séra by mal byť približne 10-násobok objemu tekutiny obsahujúcej erytrocyty.
  5. Kvapky v jamkách miešajte tyčinkou.
  6. Na urýchlenie reakcie mierne potraste tabletou.
  7. Po troch minútach pridajte jednu kvapku NaCl do jamiek na platni, v ktorých začala aglutinácia. Počkajte ešte dve minúty.
  8. Po piatich minútach vyhodnotte výsledky reakcie v súbore, ktorý prešiel. V prípade miernej aglutinácie pridajte ďalšiu kvapku NaCl.
  • Negatívna reakcia v troch jamkách naznačuje neprítomnosť antigénov v erytrocytoch testovanej vzorky. Krv patrí do skupiny 0 (I).
  • Aglutinácia v jamkách so sérom 0 (I) a B (III) naznačuje prítomnosť aglutinogénu A a patrí do skupiny A (II).
  • Nástup reakcie so sérami 0 (I) a A (II) naznačuje prítomnosť antigénu B a skupiny B (III).
  • Výsledky reakcie vo všetkých jamkách naznačujú prítomnosť aglutinogénov A a B a zodpovedajú štvrtej skupine AB (IV).

V druhom prípade by ste sa mali uistiť, že nedochádza k nešpecifickej reakcii: na platňu naneste 2 - 3 kvapky zodpovedajúcej sérovej skupiny AB (IV) a pridajte jednu kvapku analyzovaných erytrocytov. Kvapaliny premiešajte a po piatich minútach vyhodnoťte výsledok. Neprítomnosť aglutinácie naznačuje, že patrí do skupiny AB (IV), prítomnosť je znakom nešpecifickej reakcie. V takom prípade, ako aj v prípade miernej aglutinácie, opakujte štúdiu s inými sérami.

Technika stanovenia krvnej skupiny pomocou tsololónov

Monoklonálne protilátky proti antigénom erytrocytov nahradili izohemaglutinačné séra. Pre každú typizáciu postačuje jedna dávka reagencií anti-A, anti-B, anti-AB. Zavedenie monoklonálnych reagencií významne zjednodušilo a štandardizovalo metódu stanovenia krvnej skupiny AB0. Tu je rýchly podrobný návod na uskutočnenie výskumu na tablete.

  1. Zaistite dobré osvetlenie. Pracujte pri izbovej teplote.
  2. Predmetom výskumu sú médiá obsahujúce erytrocyty.
  3. Jamky na štítkové štítky: anti-A, anti-B, anti-AB alebo použite štítok so štítkom.
  4. Do každej z troch označených jamiek nadávkujte približne 0,1 ml príslušného monoklonálneho činidla.
  5. Pridajte približne 0,03 ml analyzovaných erytrocytov vedľa každej kvapky diagnostika.
  6. Zmiešajte činidlo s erytrocytmi v jamkách so samostatnými jednotlivými sklenenými tyčinkami.
  7. Tabletu pretrepte asi tri minúty.
  8. Skontrolujte aglutináciu v jamkách.

Reakcia sa zvyčajne zistí už v prvých sekundách po zmiešaní. Slabé varianty antigénov A a B môžu súčasne spôsobiť neskoršiu aglutináciu.

Stanovenie krvnej skupiny nepriamou metódou: algoritmus akcií

Metóda stanovenia krvnej skupiny je založená na interakcii erytrocytov od vopred pripravených jedincov skupín 0, A, B alebo zmesi erytrocytov od niekoľkých darcov jednej skupiny s izohemaglutinínmi α a β v študovanom sére..

S každým typizačným činidlom používajte suché a čisté pipety. Opláchnite miešacie tyčinky a pipety v 0,9% roztoku NaCl.

  • Pripravte si tanier alebo tanier. Zabezpečte dobré osvetlenie miestnosti.
  • Odoberte 3 - 5 ml krvi bez stabilizátora do skúmavky. Nechajte srvátku odležať 1,5 - 2 hodiny pri izbovej teplote.
  • Erytrocyty sa premyjú 0,9% soľným roztokom. Pripravte si 5% kašu.
  • Označte na tablete časti: 0 (I), A (II), B (III).
  • Do každej z troch jamiek nadávkujte 2 kvapky (približne 0,1 ml) analyzovanej plazmy.
  • Do každej jamky pridajte asi 0,03 ml testovaných červených krviniek.
  • Pomocou samostatných tyčiniek zmiešajte typizované červené krvinky so sérom.
  • Tabletu jemne pretrepte po dobu 5 minút.
  • Vykonajte vizuálne vyhodnotenie výsledkov aglutinačného testu v prechádzajúcom svetle.

Záver o pridružení k skupine

Plazmatické výsledky so štandardnými erytrocytmiSkupinová príslušnosť
0 (I)A (II)B (III)
-++0 (I)
--+A (II)
-+-B (III)
---AB (IV)

+ - prítomnosť aglutinácie, - - negatívny výsledok reakcie.

  • 0 (I): reakcia v jamkách A (II), B (III) (detekované protilátky α a β).
  • A (II): aglutinácia erytrocytmi B (III) (zistené β aglutiníny).
  • B (III): aglutinácia v otvore A (II) (stanovené α aglutiníny).
  • AB (IV): žiadna reakcia nemá výsledky vo všetkých jamkách (v plazme sa nezistili žiadne protilátky).

Systém Rhesus

Levine a Stetson objavili v roku 1939 antigény Rhesus. Vedci skúmali dôvody vývoja hemolytických reakcií u pôrodných žien počas transfúzií ženám s rovnakými erytrocytmi manželov v systémoch AB0, MN a P. O rok neskôr Landsteiner a Wiener produkovali protilátky imunizáciou králikov erytrocytmi z opíc rhesus. Protilátky sa nazývajú anti-RH protilátky. Výsledné aglutiníny vstúpili do aglutinačnej reakcie s erytrocytmi opíc rhesus a s erytrocytmi 85% Newyorčanov bielej rasy. Antigén, ktorý spôsobil tvorbu protilátok, sa nazýva RH-faktor (D-faktor).

V zriedkavých prípadoch ľudské červené krvinky neobsahujú žiadny antigén rhesus. Fenotyp sa nazýva Rhnulový. Gene Xro v tomto prípade je prezentovaný v homozygotnej forme a potláča produkciu všetkých antigénov. Fenotyp Rhnulový nevykazujú aglutinogénnu aktivitu, ale majú schopnosť prenášať antigény dedením.

Medzi Európanmi je frekvencia Rh pozitívnych na jednotlivcov s antigénom D 85%. Membrána červených krviniek zvyčajne obsahuje asi 10 000 - 30 000 molekúl D. Existujú dva špeciálne typy D-pozitívnych osôb: Du (slabá) a D čiastočná (čiastočná). Imunitný systém Du a D parciálny je schopný produkovať anti-D protilátky.

Slabý antigén sa vyskytuje u 1,5% Rh-pozitívnych jedincov a je charakterizovaný nízkym počtom (100-500) D molekúl na membráne. Je imunogénny pre Rh negatívnych jedincov. V tomto prípade môže transfúzia D-pozitívnych erytrocytov pacientom so slabým D spôsobiť senzibilizáciu krviniek darcu. Erytrocyty s Du sú slabo aglutinované alebo vôbec nevstupujú do priamej aglutinačnej reakcie s kompletnými anti-Rh protilátkami. Stanovenie príslušnosti k Rh sa uskutočňuje nepriamym antiglobulínovým testom. D u dopravcovia sa považujú za Rh pozitívnych darcov a Rh negatívnych príjemcov.

Čiastočný D je deficitný v jednom alebo viacerých epitopoch proteínovej molekuly. Imunitný systém ľudí s čiastočným D je schopný produkovať protilátky proti chýbajúcim epitopom. Medzi nosičmi čiastočného antigénu sa rozlišuje sedem skupín osôb. Najväčší klinický význam je prenos D VI (je prítomný iba epitop Z): majitelia tejto kategórie produkujú protilátky proti nezmenenému antigénu a proti parciálnym antigénom D I - D V, D VII. Technika stanovenia Rh faktora D VI spočíva v postupnom použití dvoch diagnostických metód: monoklonálne IgM anti-D protilátky (anti-D-Super alebo Anti-D IgM tsoliklon) a anti-D polyklonálne alebo monoklonálne IgG protilátky (štandardné univerzálne činidlo alebo anti-D-tsoliclon) -D). Negatívny výsledok reakcie v prvom a pozitívny výsledok v druhej fáze štúdie naznačuje detekciu D VI. Typicky kategória D VI zodpovedá genotypu CcDee. Tehotným ženám s D VI pri nosení plodu s úplným D je predpísaný anti-rhesusový imunoglobulín.

Protilátky proti antigénom Rhesus sú imunné. Vznikajú v dôsledku izosenzibilizácie. Špecifickosť je určená antigénmi, ktoré vyvolávajú tvorbu protilátok. Izolujte úplné a neúplné protilátky.

Kompletné sú protilátky IgM. Majú vysokú molekulovú hmotnosť a nachádzajú sa menej často ako neúplné protilátky. Schopný aglutinovať Rh-pozitívne erytrocyty. Pri transfúziách sú menej dôležité.

Neúplné patria prevažne do triedy IgG. Sú fixované na povrchu Rh-pozitívnych erytrocytov bez tvorby aglutinátov. Väzba krviniek sa uskutočňuje v prítomnosti koloidných roztokov a proteolytických enzýmov alebo po liečbe antiglobulínovým sérom. Majú nižšiu molekulovú hmotnosť v porovnaní s kompletnými protilátkami. Schopný prekonať placentu. Počas senzibilizácie sa najskôr vytvárajú kompletné protilátky, potom sa vo väčšej miere vytvárajú nekompletné (IgG imunoglobulíny) protilátky.

Technika stanovenia faktora Rh pomocou anti-D-Super tsoliklonu

Tsoliklon Anti-D-Super je kompletná ľudská protilátka anti-D IgM. Na získanie spoľahlivých výsledkov musí analyzovaná vzorka obsahovať dostatočné množstvo červených krviniek..

  1. Zaistite dobré osvetlenie a izbovú teplotu v miestnosti.
  2. Na misku sa umiestni jedna veľká kvapka (približne 0,1 ml) Anti-D IgM.
  3. Vložte jednu malú kvapku (približne 0,03 ml) testovaných červených krviniek do blízkosti.
  4. Zmiešajte dve kvapky so sterilnou tyčinkou.
  5. Po 10 - 15 sekundách platňu jemne pohojdávajte 20 - 30 sekúnd.
  6. Tri minúty po zmiešaní skontrolujte aglutináciu.

V prípade reakcie sa krv hodnotí ako Rh-pozitívna (Rh +), v neprítomnosti reakcie - ako Rh-negatívna (Rh-). V prípade negatívnej alebo slabej aglutinácie je potrebné znovu vykonať štúdiu s neúplnými anti-D IgG protilátkami, aby sa zistil slabý alebo čiastočný antigén D.

Metóda stanovenia faktora Rh D u pri skúmavke

Paralelne s analýzou sa uskutočňujú tri kontrolné vzorky: anti-D (anti-D IgG) tsoliklonové činidlo so štandardnými Rh pozitívnymi a Rh negatívnymi erytrocytmi, analyzované erytrocyty želatínovým roztokom bez anti-D IgG diagnostika.

  1. Vložte do skúmavky 0,05 - 0,1 ml (jedna kvapka) erytrocytov zo zrazenej krvnej zrazeniny alebo umytej z konzervačnej látky..
  2. Pridajte 0,1 ml (dve kvapky) 10% želatíny zohriatej na skvapalnenie pri 45 - 50 ° C.
  3. Pridajte jednu kvapku Anti-D (anti-D IgG) zoliclonu.
  4. Zmiešať.
  5. Skúmavku inkubujte vo vodnom kúpeli 10 - 15 minút alebo v inkubátore pri 48 ° C pol hodiny.
  6. Pridajte 5 - 6 ml izotonického roztoku.
  7. Skúmavku 1 - 2 krát obráťte.
  8. Posúďte prítomnosť aglutinácie v prechádzajúcom svetle.

Absencia výsledkov reakcie s anti-D IgM a výrazná aglutinácia s anti-D IgG naznačujú detekciu slabých foriem antigénu D. V prípade slabej aglutinácie by sa štúdia mala opakovať v nepriamom Coombsovom teste..

Stanovenie príslušnosti k Rh štandardným univerzálnym činidlom

Štandardné činidlo Antiresus Rh0D obsahuje polyklonálne neúplné anti-D protilátky. Paralelne s analýzou vzorky sa uskutočnila kontrolná štúdia s činidlom Rh0D so štandardnými Rh-pozitívnymi (jedna skupina alebo skupina 0) a Rh-negatívnymi (jedna skupina) erytrocytov.

  1. Vložte jednu kvapku Rh diagnostika na dno skúmavky0D.
  2. Pridajte jednu kvapku analyzovaných červených krviniek.
  3. Skúmavku niekoľkokrát pretrepte.
  4. Sklopte hadičku takmer do vodorovnej polohy a pomaly ju otáčajte najmenej 3 minúty. Rozprestretie obsahu pozdĺž stien poskytne výraznejší výsledok reakcie. K aglutinácii zvyčajne dôjde počas prvých 60 sekúnd. Je potrebný čas na detekciu slabého antigénu Du.
  5. Pridajte 2 - 3 ml izotonického roztoku NaCI a skúmavku 2 - 3-krát obráťte bez pretrepávania.
  6. Vizuálne vyhodnotte prítomnosť aglutinácie. Výrazné vločky na pozadí číreho roztoku naznačujú prítomnosť antigénu D. Rovnomerne zafarbená kvapalina naznačuje absenciu antigénu.

Výsledok sa považuje za spoľahlivý až po kontrole kontrolných vzoriek: nástup reakcie so štandardnou Rh pozitívnou a žiadna reakcia - s Rh negatívnymi erytrocytmi.

Informácie o postupnej formulácii nepriameho Coombsovho testu s použitím neúplných anti-D-protilátok nájdete v časti „Coombsova reakcia“ na webovej stránke..

Pre Viac Informácií O Cukrovke