Analýza ELISA: čo to je? prečo je to potrebné? klady a zápory metódy

Analýza ELISA - čo to je? Celý názov tejto diagnostickej metódy sa nazýva enzýmovo viazaný imunosorbentný test a je založený na stanovení protilátok rôznych tried alebo imunoglobulínov, ktoré sú produkované ľudským telom, v periférnej krvi..

V praxi lekára je analýza ELISA veľmi dôležitá, keď je potrebné diagnostikovať infekčnú patológiu. Táto analýza ukazuje nielen prítomnosť infekčného ochorenia, ale aj štádium patologického procesu. Tiež nielen vo vzťahu k patogénu je indikovaná metóda ELISA: používa sa na diagnostiku alergických stavov. Tento test umožňuje identifikovať problémy v imunitnom systéme, pri mnohých ochoreniach krvotvorného systému, autoimunitných a iných poruchách.

Prečo je potrebné IFA?

Všetci vedci sa prikláňajú k názoru, že názov „protilátka“ je príliš nešťastný. Stále však odráža jednu dôležitú vlastnosť imunoglobulínov: sú schopné viazať a neutralizovať škodlivé látky a pristupovať k nim ako k „zámku“. Množstvo protilátok v krvi odráža nielen všeobecnú schopnosť tela brániť sa proti infekciám, ale aj schopnosť vytvárať cirkulujúce imunokomplexy, ktoré sa môžu vyskytnúť pri rôznych autoimunitných ochoreniach, napríklad pri reumatoidnej artritíde alebo pri ankylozujúcej spondylitíde..

Komplexy protilátok s antigénom (škodlivý faktor infekčnej povahy) sú výsledkom reakcie tela na zavedenie „outsiderov“. Imunitný systém sa ich preto naučí rozpoznávať, pomocou lymfocytov trénuje imunokompetentné bunky a sú schopné produkovať vysoko špecifické protilátky. Protilátky proti vírusu Epstein sú teda usporiadané inak ako protilátky proti vírusovej hepatitíde C alebo E. coli a anti-HAV alebo protilátky proti vírusu hepatitídy A - inak ako autoprotilátky proti tkanivu chrupavky. Vďaka vysokej špecifickosti a zhode imunoglobulínov s infekčným agens je vysoko cenný taký laboratórny výskum, ako je enzýmovo viazaný imunosorbent..

Po silnom spojení protilátok a antigénov do jedného komplexu (antigén-protilátka) škodlivé faktory strácajú schopnosť poškodiť tkanivá tela a potom sú tieto komplexy neutralizované alebo lýzované fagocytózou neutrofilmi a „trávené“ z tela odchádzajú..

Krvný test ELISA môže ukázať, s akým špecifickým patogénnym faktorom naše telo čelí, v akom štádiu je proces interakcie medzi telom a infekciou. Po ukončení štúdie môže lekár urobiť prognózu s vysokou mierou dôvery, predpísať určité typy liečby a v niektorých prípadoch dokonca určiť dĺžku života pacienta, najmä pri chronických vírusových infekciách, napríklad pri vírusovej hepatitíde C.

Ale v niektorých prípadoch v tele nie sú vôbec žiadne infekčné agens a protilátky „omylom“ napádajú ich vlastné orgány a tkanivá, pretože imunokompetentné bunky dostali nepravdivé informácie. Takéto choroby sa nazývajú autoimunitné a enzýmová imunotest tiež pomáha rozpoznať túto chronickú patológiu a pomáha pri diagnostike.

Viac o imunoglobulínoch

Ľudské telo celkovo produkuje 5 známych tried protilátok, ktoré sa označujú ako Ig (čo znamená imunoglobulíny) a ktoré patria do tried A, M, G, E a D. Všetky z nich majú veľký význam pri interpretácii výsledkov analýzy ELISA. Samozrejme, komplexov je oveľa viac a nie všetky sú stále otvorené. Ale pri diagnostike rôznych chorôb sú najcennejšie prvé tri typy protilátok. Krvný test ELISA využíva čo najviac informácií: okamih, keď sa protilátky objavia v krvi, zmena ich koncentrácie v závislosti od času, doba zmiznutia a typ špecifických protilátok.

Účastníkmi primárneho akútneho infekčného procesu sú teda imunoglobulíny triedy M, ktoré vždy naznačujú akútnu fázu, aj keď je choroba klinicky vymazaná. Typickým príkladom je anicterická forma akútnej vírusovej hepatitídy B alebo C. Enzýmová imunoanalýza na hepatitídu ukáže, že človek má akútnu hepatitídu a príznaky ako bolesť v hypochondriu, sucho v ústach, boľavé kĺby a ďalšie nešpecifické príznaky budú ľahko pochopiteľné.

O niekoľko týždňov neskôr sa tieto protilátky nachádzajú v čoraz miznúcej koncentrácii, ktorá vedie k imunoglobulínom triedy G. Stanovujú sa v krvi mnoho mesiacov a dokonca rokov a naznačujú buď zotavenie, ale potom môžu zostať doživotne a vytvárať silný imunitný systém. To naznačuje silnú ochranu pred patogénnymi antigénmi. Takže sú to protilátky tejto triedy, ktoré robia človeka imunným voči opakovaným prípadom antraxu a moru. Existujú však situácie, keď tieto protilátky nezabraňujú svojim škodlivým účinkom v prítomnosti antigénov. V tomto prípade môžeme hovoriť o zvýšení aktivity chronického procesu..

Pokiaľ ide o IgE, uplatňuje sa pri diagnostike rôznych parazitárnych invázií a alergických stavov. IgD plní pomocnú funkciu: enzýmovo viazaný imunosorbentný test umožňuje jeho použitie pri komplexnej diagnostike bronchiálnej astmy a autoimunitných stavov. Dešifrovanie analýzy ELISA je samozrejme oveľa komplikovanejšie a odborníci - imunológovia môžu povedať oveľa viac. Čo naznačuje, že sa pacient môže nezávisle obrátiť na laboratórium, aby uskutočnil výskum?

Indikácie pre analýzu

Najskôr musíte pochopiť, že takáto analýza neexistuje - „iba krv pre ELISA“. Existuje analýza pre hepatitídu, stáva sa - pre ureaplazmu alebo pre syfilis. Darcovstvo krvi na test ELISA teda možno zacieliť iba „objednávaním“ hľadania požadovanej infekcie. Je to len také nepochopiteľné, prečo darovať krv z žily, nevediac, čo hľadať. Z tohto dôvodu je enzýmový imunotest silným nástrojom, ktorý je dôležitý pri diagnostickom výskume. Túto analýzu môže predpísať iba lekár, pretože cielene hľadá infekciu charakterizovanú týmito príznakmi. Bežný človek si, samozrejme, môže objednať 150 krvných testov metódou ELISA na „všetky infekcie“, čo by však bol neprimeraný a nákladný prístup k diagnostike, ak by sa robili testy na všetko..

Najžiadanejšie vymenovanie týchto testov na nasledujúce choroby a stavy:

Rôzne mikrobiálne a vírusové infekcie, príznaky infekčných chorôb - vyrážka, horúčka, žltačka, opuchnuté lymfatické uzliny, hnačkový syndróm, podozrenie na pohlavne prenosné choroby.

Technika ELISA pomáha pri stanovení ureaplazmy a mykoplazmy, syfilisu a chlamýdií, tuberkulózy a cytomegalovírusovej infekcie, oparu, vírusovej hepatitídy a vírusu Epstein-Barr. V súčasnosti je možné pomocou enzýmového imunotestu overiť asi 500 rôznych infekcií.,

Ak máte podozrenie na helmintickú inváziu a výskyt príznakov ako alergie, eozinofília v krvi, svrbenie, dyspepsia a strata hmotnosti,

Prečítajte si viac o tomto type výskumu v článku „Krvný test na červy a parazity: metódy výskumu, ELISA, komu a ako darovať?“.

Keď sa zistia alergény, ktoré spôsobujú Quinckeho edém, žihľavku, dýchavičnosť a astmatické záchvaty.

V tomto prípade sa zistí špecifický Ig E a existujú celé panely pre alergiu, ktoré pomôžu presne určiť alergén - kalmáre alebo krevety, suché krmivo pre ryby obsahujúce dafnie, domáci prach. Pri pollinóze vám táto metóda umožňuje nájsť presne tie obilniny, kríky alebo stromy, ktoré spôsobujú jarné kýchanie a slzenie očí.,

  • Táto metóda sa zobrazuje v prípade podozrenia na autoimunitné ochorenia, ktoré liečia reumatológovia,
  • Ak existuje podozrenie na rast a aktivitu nádoru,
  • Pri komplexnej diagnostike stavov imunodeficiencie a HIV infekcie,
  • Pri ochoreniach krvi a pri transplantácii, na komplexné posúdenie imunity, napríklad pred transplantáciou pečene alebo obličiek.

Teraz vieme, prečo musíte darovať krv na test ELISA. Zistite, ako sa uskutočňuje táto štúdia.

Ako sa robí analýza?

Klasickým materiálom je venózna krv pacienta. Ale ak je to potrebné, môžete preskúmať širokú škálu tekutín a tkanív: hlien, sliny, cervikálne sekréty, mozgovomiechový mok, sklovité telo oka, obsah pupočnej šnúry a plodovej vody. Je dôležité mať na pamäti, že užívanie rôznych liekov, nadmerná fyzická aktivita, zneužívanie alkoholu môžu výrazne skresliť výsledky testu..

Existuje niekoľko metód, ktoré umožňujú túto analýzu. Najbežnejšou metódou používanou v klinických laboratóriách je fotometrická metóda. V tomto prípade sa používajú látky označené farbou, po reakcii ktorých a po označení komplexu antigén-protilátka sa zmení ich farba. Vďaka tomu sa tiež mení optická hustota roztoku a táto zmena je priamo úmerná koncentrácii detegovaných protilátok. Na meranie týchto odchýlok sa úspešne používajú laboratórne spektrofotometre.

Pre ELISA sa tiež používa fluorometrická metóda, ktorá je založená na fluorescencii. Aj tu sa počíta intenzita fluorescenčných látok, ktoré sa usadili na študovaných vzorkách..

Nakoniec imunologická analýza využíva elektrochemické metódy na stanovenie aktivity enzýmov, ktoré sú špecifickými značkami pre antigény a protilátky. Samotný enzýmový imunotest najčastejšie zahŕňa použitie enzýmov, ako sú alkalická fosfatáza, chrenová peroxidáza a galaktozidáza. Tieto enzýmy sú schopné viazať sa na protilátky alebo antigény a značiť ich vďaka svojej aktivite.

Nevýhody metódy a jej klady

Medzi zjavné „plusy“ patria demokratické náklady na analýzu, možnosť jej skríningu u veľkých skupín obyvateľstva, napríklad pri vyšetrovaní HIV na tehotné ženy. Metóda enzýmovej imunotesty je dosť špecifická a dá sa použiť na kontrolu kvality liečby mnohých chorôb. Je dôležité, aby bola analýza vypracovaná rýchlo, aby bola pre pacienta jednoduchá a bezpečná..

Existuje však veľa nástrah. Pokiaľ teda nie sú zistené imunoglobulíny, neznamená to stopercentnú absenciu choroby. Na pozadí imunodeficiencie telo skutočne nemusí „mať silu“ syntetizovať protilátky. Ak má pacient vážne zlyhanie pečene, potom pečeň jednoducho nedokáže syntetizovať proteín, ktorý je stavebným kameňom protilátok. V tomto prípade sa výsledok nazýva séronegatívny a potvrdenie infekcie sa vyžaduje priamou a najpokročilejšou metódou výskumu - PCR alebo polymerázovou reťazovou reakciou. Na rozdiel od imunosorbentného testu viazaného na enzýmy táto metóda neodhaľuje reakciu tela na infekčný proces (ktorý môže byť chybný alebo úplne chýba), pri použití PCR sa priamo stanoví dedičný materiál alebo sa lokalizuje samotný patogén..

Metóda enzýmového imunotestu môže poskytnúť chybu na pozadí mnohých chronických chorôb a na pozadí imunosupresívnej liečby. V helmintológii a parazitológii existuje zákon: iba detekcia parazita alebo jeho vajíčok je absolútne spoľahlivým spôsobom stanovenia diagnózy. ELISA môže poskytnúť krížové a falošne pozitívne metódy reagujúce na mnoho bežných udalostí v živote pacienta.

Na záver je potrebné povedať, že enzýmovo viazaný imunosorbent je účinný, ale pomocný spôsob laboratórnej diagnostiky mnohých chorôb. Ale v každom prípade by diagnóza mala vychádzať z mnohých faktorov: sťažnosti a anamnéza pacienta, údaje o vyšetrení a ďalšie pomocné a inštrumentálne diagnostické metódy.

ELISA test na koronavírus

Od 27. marca 2020 môže byť na serveri ProfMedLab každý testovaný na COVID-19. Môžete zavolať nášho odborníka, aby vykonal analýzu doma a uzavrel s klinikou dohodu o testovaní so zamestnancami v mene právnickej osoby..
V máji spoločnosť Profmedlab vykonala už viac ako 2 000 testov na koronavírusovú infekciu.

Kvôli aktívnemu šíreniu koronavírusovej infekcie COVID-19 sa osobitná pozornosť venuje nielen liečbe, ale aj včasnému zisteniu tohto ochorenia. V súčasnosti väčšina lekárskych inštitúcií používa metódu PCR (polymerázová reťazová reakcia). Jeho cieľom je detekcia vírusovej RNA v epitele horných dýchacích ciest. To znamená, že ak osoba už mala koronavírusovú infekciu, potom bude výsledok PCR negatívny..

Relatívne nedávno sa diagnóza COVID-19 začala uskutočňovať pomocou enzýmového imunotestu. Na rozdiel od PCR detekuje špecifické protilátky v krvi. To vedie k jednej dôležitej výhode metódy. S jeho pomocou môžete identifikovať nielen aktívne formy ochorenia, ale aj zistiť, či osoba mala alebo nemala koronavírus..

Čo sú imunoglobulíny a ako súvisia s COVID-19

Imunoglobulíny (Ig) sú špecifické proteíny, ktoré sa vylučujú bunkami imunitného systému v reakcii na prítomnosť patogénov. Hlavné funkcie imunoglobulínov sú:

  • Väzba na patogénne antigény.
  • Neutralizácia patogénu.
  • Zapojenie ďalších „zložiek“ imunitného systému do potlačenia cudzích pôvodcov.

Existuje niekoľko tried imunoglobulínov, ale ak hovoríme o koronavírusovej infekcii (a ďalších chorobách), potom sú najzaujímavejšie dve z nich - IgG a IgM..

Imunoglobulíny triedy M sa vyrábajú ako prvé ako reakcia na penetráciu tohto alebo toho patogénu do tela. Stanovenie týchto protilátok je preto dôležité pri diagnostike akútneho štádia ochorenia, keď je patogén v tele prítomný..

Imunoglobulíny triedy G poskytujú ďalšiu ochranu pred opätovným vstupom patogénu. Ich maximálna koncentrácia sa pozoruje približne tri týždne po infekcii COVID-19..

IgM teda naznačuje prítomnosť akútnej infekcie a IgG pomáha potvrdiť skutočnosť, že osoba už bola chorá..

Vlastnosti enzýmového imunotestu

Metóda ELISA sa vyznačuje svojou jednoduchosťou, vysokou rýchlosťou analýzy (obzvlášť dôležitá pre expresné testy) a umožňuje vám získať ďalšie informácie (osoba bola chorá alebo je stále chorá). Výskum môže byť navyše kvalitatívny alebo kvantitatívny. V prvom prípade sa zisťuje samotná skutočnosť prítomnosti špecifických imunoglobulínov a v druhom sa zisťuje ich koncentrácia, čo umožňuje nepriamo posúdiť priebeh ochorenia.

Metóda má však určité nevýhody. Jedným z nich je relatívne nízka citlivosť a špecifickosť. To znamená, že ELISA môže poskytnúť falošne pozitívne a falošne negatívne výsledky. Okrem toho bude enzýmový imunotest neinformatívny, ak sa uskutoční v prvých dňoch po infekcii, pretože hladina imunoglobulínov stúpa do 3 - 5 dní. A konečne, ELISA vám umožňuje určiť reakciu imunitného systému na prítomnosť špecifického patogénu v tele, ale samotný patogén nemožno touto metódou zistiť..

Preto je v niektorých prípadoch vhodné kombinovať ELISA a PCR, aby sa získali spoľahlivé a najkompletnejšie údaje o vlastnostiach priebehu koronavírusovej infekcie..

Náklady na výskum

Klinika ProfMedlab ponúka niekoľko typov testov na protilátky proti COVID-19:

  • Kvantifikácia imunoglobulínov triedy G. Analýza umožňuje pochopiť, či osoba prekonala koronavírusovú infekciu alebo nie. Náklady na výskum - 3200 rubľov. Materiálom pre výskum je venózna krv. Podmienky - 24 hodín.
  • Kvantitatívne stanovenie imunoglobulínov triedy G a M. Pre získanie najobjektívnejších informácií odporúčame kombinovať s PCR. Náklady na výskum - 3 900 rubľov. Materiálom pre výskum je venózna krv. Podmienky - 2-3 dni.
  • Rýchly test Protilátkový test SARS-CoV-2. Môžete to urobiť sami doma alebo na našej klinike a potom sa poraďte s lekárom. Náklady na expresný test sú 2 900 rubľov. Materiál pre výskum je kapilárna krv (z prsta). Výsledok bude hotový za 20 minút.

Obdobie výskumnej pripravenosti je od 1 dňa od okamihu zberu materiálu. Ceny za tieto a ďalšie typy analýz sú uvedené v tabuľke:

Názov službyCena výskumu, rub.
Kvantitatívna analýza protilátok IgG na infekciu koronavírusom SARS-Co-V-2 pomocou testu ELISA (krvný test) na klinike.3200
Stanovenie protilátok IgM a IgG na infekciu koronavírusom SARS-Co-V-2 pomocou testu ELISA (krvný test), na klinike3900
Rýchly test na protilátky SARS-CoV-2 (krv), výsledok po 20 minútach2900
PCR analýza na koronavírusovú infekciu SARS-Co-V-2 (náter), na klinike2400
PCR analýza na koronavírusovú infekciu SARS-Co-V-2 (náter) + návšteva domu ústredného správneho obvodu3500
PCR analýza na koronavírusovú infekciu SARS-Co-V-2 (náter) + domáca návšteva v rámci Moskovského okruhu5500
PCR analýza na koronavírusovú infekciu SARS-Co-V-2 (náter) + výjazd do 35 km od Moskovského okruhu7000
Stanovenie IgG protilátok proti koronavírusovej infekcii SARS-Co-V-2 pomocou testu ELISA (krvný test) - návšteva až 10 osôb.3900
Stanovenie IgG protilátok proti koronavírusovej infekcii SARS-Co-V-2 pomocou ELISA (krvný test) - odchod 10 - 30 osôb3500
Stanovenie IgG protilátok proti koronavírusovej infekcii SARS-Co-V-2 pomocou ELISA (krvný test) - odchod 30 - 75 osôb3200
Stanovenie IgG protilátok proti koronavírusovej infekcii SARS-Co-V-2 pomocou ELISA (krvný test) - odchod 75 - 150 osôb3 000

Ako objednať analýzu?

Ak chcete vykonať analýzu, vyplňte nasledujúci formulár.

  • Výskum na COVID-19 sa nedá robiť anonymne. Nezabudnite vyplniť údaje z pasu.
  • Prihlášku je možné podať iba pre jednu osobu. Ak chce analýzu vykonať niekoľko osôb žijúcich na tej istej adrese, musí byť pre každú vyplnená žiadosť.

Ďalšie informácie získate na telefónnom čísle: +7 (495) 308-39-92.

Metóda ifa, čo to je

Enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA) je jedným z typov imunochemickej analýzy. Je založená na vysoko špecifickej imunologickej reakcii antigénu (AG) so zodpovedajúcou protilátkou (AT) s tvorbou imunitného komplexu. V tomto prípade je jedna zo zložiek konjugovaná s enzýmom. Výsledkom reakcie enzýmu s chromogénnym substrátom je farebný produkt, ktorého množstvo je možné určiť spektrofotometricky.

Každá verzia ELISA obsahuje 3 povinné fázy:

  1. Štádium rozpoznávania testovanej zlúčeniny špecifickou protilátkou;
  2. Krok vytvorenia väzby konjugátu s imunitným komplexom alebo s voľnými väzbovými miestami;
  3. Fáza premeny enzýmovej značky na zaznamenaný signál.

Reakcia zahŕňa:

  • Tuhá fáza;
  • AG a AT;
  • Konjugát (antigén alebo protilátka značená enzýmom);
  • Enzýmový marker;
  • Substrát;
  • Zastavovacie činidlo (najčastejšie sa používa kyselina sírová).

Tuhá fáza

Ako pevná fáza pre test ELISA je možné použiť rôzne materiály: polystyrén, polyvinylchlorid, polypropylén a ďalšie. Ako tuhá fáza môžu slúžiť steny skúmavky, 96-jamkové a ďalšie doštičky, guľôčky, guľôčky, ako aj nitrocelulóza a ďalšie membrány, ktoré aktívne sorbujú proteíny..

Antigény a protilátky

AG a AT použité v teste ELISA musia byť vysoko purifikované a vysoko aktívne. AH by mala mať vysokú antigénnosť, optimálnu hustotu a počet antigénnych determinantov.
Citlivosť testu ELISA závisí od koncentrácie, aktivity a špecificity použitých protilátok. Použité protilátky môžu byť poly- alebo monoklonálne, rôznych tried (IgG alebo IgM) a podtriedy (IgG1, IgG2).
Citlivosť a špecifickosť metódy sa zvyšuje s použitím monoklonálnych protilátok. V tomto prípade je možné zistiť nízke koncentrácie AG (AT) vo vzorkách.

Enzýmové markery: chrenová peroxidáza (HRP), alkalická fosfatáza (ALP) a β-D-galaktozidáza sú najbežnejšie používané.

Podklady

Výber substrátu je primárne určený enzýmom použitým ako značka, pretože reakcia „enzým-substrát“ je veľmi špecifická.

  • Pre HRP sa ako substrát používa 3,3 ', 5,5'-tetrametylbenzidín (TMB chromogén). Nastáva farebná reakcia, ktorej intenzita závisí od množstva viazaného analytu;
  • Pre ALP je substrátom 4-nitrofenylfosfát;
  • β-D-galaktozidáza katalyzuje hydrolýzu laktózy za vzniku glukózy a galaktózy.


Klasifikácia ELISA

Klasifikácia metód ELISA je založená na niekoľkých prístupoch:

1 - podľa typu reagencií prítomných v prvom stupni testu ELISA:

  • V kompetitívnej ELISA v prvom štádiu systém obsahuje analyzovanú zlúčeninu aj jej analóg, značený enzýmom a súťaží s ním o špecifické väzbové miesta;
  • Nekonkurenčné metódy sú charakterizované prítomnosťou analyzovanej zlúčeniny a špecifických väzbových miest iba v prvom stupni.

2 - podľa princípu stanovenia testovanej látky:

  • Priame stanovenie koncentrácie látky (AG alebo AT). Používajú sa protilátky proti testovanej látke kombinované so špecifickým štítkom. V takom prípade bude značka vo vytvorenom špecifickom komplexe AG-AT. Koncentrácia analytu bude priamo úmerná zaznamenanému signálu;
  • Nepriame stanovenie koncentrácie látky - rozdielom medzi celkovým počtom väzbových miest a zvyšnými voľnými väzbovými miestami. V tomto prípade sa zvýši koncentrácia analytu a zaznamenaný signál sa zníži, preto je v tomto prípade pozorovaná inverzná závislosť na hodnote zaznamenaného signálu..

3 - podľa typu výsledkov:

  • Kvantitatívne;
  • Semikvantitatívne;
  • Kvalitatívne.


Konkurenčná ELISA

  1. Špecifické monoklonálne protilátky sú imobilizované na pevnej fáze;
  2. Do jamiek panelov sa zavádza antigén označený enzýmom a testovaná vzorka v známej koncentrácii. Pozitívne a negatívne kontroly sú umiestnené paralelne do susedných jamiek. Na vytvorenie kalibrácie sa použije štandardný neznačený antigén v rôznych zriedeniach. Inkubácia a premytie sa uskutočňujú;
  3. Pridajte substrát, inkubujte, zastavte reakciu, keď sa v jamkách pre pozitívnu kontrolu vytvorí optimálne sfarbenie;
  4. Výsledky sa zaznamenávajú na čítačke ELISA. Koncentrácia analytu je nepriamo úmerná optickej hustote.

Konkurenčná ELISA na stanovenie protilátok: cieľové protilátky a protilátky značené enzýmom navzájom súťažia o antigény sorbované na pevnej fáze..


Nekonkurenčný „sendvič“ - variant ELISA

Hlavnou výhodou metódy je jej vysoká citlivosť, ktorá prekonáva možnosti iných schém ELISA..

  1. Monoklonálne protilátky alebo afinitne purifikované polyklonálne protilátky sú imobilizované na pevnej fáze;
  2. Testovacia vzorka sa vloží do jamiek panelov, paralelne sa umiestni pozitívna kontrolná vzorka a negatívna kontrolná vzorka v rôznych zriedeniach. Inkubujte a umyte;
  3. Do jamiek sa pridávajú enzýmom označené monoklonálne alebo polyklonálne protilátky - konjugát. Po inkubácii sa uskutoční premytie, aby sa odstránili nenaviazané protilátky;
  4. Substrát je zavedený, inkubovaný. Reakcia sa zastaví, keď sa v jamkách pre pozitívnu kontrolu dosiahne optimálne zafarbenie;
  5. Výsledky sa zaznamenávajú na čítačke ELISA. Koncentrácia analytu je priamo úmerná optickej hustote.

Kvalitatívna analýza sa často používa pri skríningových štúdiách a diagnostike infekčných chorôb. Výsledok štúdie sa stanoví porovnaním jeho optickej hustoty s vypočítanou hodnotou kritickej optickej hustoty (OPcrit., „Cut-off“).

Vzorec pre výpočet „Cut-off“ je uvedený v pokynoch pre testovací systém. Výpočet „Cut-off“ môže zahŕňať tak priemerné hodnoty optických hustôt pozitívnych a negatívnych kontrol, ako aj optickú hustotu špeciálnej kontrolnej vzorky - kontrolu úrovne cut-off..
Ak je absorbancia vzorky vyššia ako medzná hodnota, považuje sa vzorka za pozitívnu na špecifické protilátky..

Pre semikvantitatívnu verziu postupu sa počíta pomer medzi priemernou optickou hustotou vzorky a optickou hustotou cut-off..

Vzorky sa považujú za:

  • kladné, ak je pomer vyšší ako 1,1;
  • pochybné, či je pomer 0,9-1,1;
  • záporná, ak je pomer nižší ako 0,9.

Pochybné výsledky analýzy nie je možné jednoznačne interpretovať a na objasnenie výsledku je potrebné vyšetrenie po 1-2 týždňoch zopakovať..


Metóda ELISA určuje:

  • Hormóny;
  • Značky nádorov;
  • Protilátky (IgG, IgM) proti patogénom - infekcie ToRCH, tuberkulóza, syfilis, vírus hepatitídy C (na HCV), mykoplazma, chlamýdie, lamblia, Helicobacter pylori atď.;
  • Vírusové antigény - hepatitída D, E, A (HDD, HEV, HAV), hepatitída C (HCVcore), hepatitída B (HBs, HBe HBcore);
  • Autoimunitné choroby.

Enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA, ELISA). Podstata, princíp metódy a etapy výskumu. Analýza protilátok, triedy protilátok, imunitný komplex.

V súvislosti s vývojom bunkových technológií, molekulárnej biológie, genetiky, fyziky, chémie a mnohých ďalších špičkových disciplín sa do každodennej praxe zavádzajú nové vysoko presné a špičkové metódy. Tieto interdisciplinárne trendy ovplyvňujú oblasť lekárskych poznatkov a súvisiace oblasti biologických a biochemických problémov. Za posledných desať rokov sa rozšírila a do masovej praxe zaviedla metóda klinickej laboratórnej diagnostiky nazývaná enzýmová imunotest..

Technológie imunologických enzymatických a rádiologických reakcií sa všeobecne používajú na typizáciu buniek, bunkových kultúr a rôznych tkanív od začiatku 80. rokov 20. storočia. Tieto metódy však boli veľmi namáhavé, nejednotné, štandardizované, čo vo veľkom rozsahu vylučovalo ich použitie na terapeutické a diagnostické účely. Tieto metódy používali iba úzke vedecky náročné a vysoko špecializované laboratóriá..

S rozvojom technológie, mikrotechnológie, výroby rôznych biopolymérnych materiálov sa však podarilo vyrobiť hotové sady enzýmových imunotestov, ktoré môžu využívať laboratóriá lekárskych inštitúcií so širokým profilom. ELISA sa široko používa na diagnostiku všetkých druhov infekcií (chlamýdie, syfilis, cytomegalovírus, toxoplazmóza, herpes atď.), Akútnych aj chronických, ako aj latentných foriem, ktoré prebiehajú bez klinických príznakov. Táto metóda sa používa aj na kontrolu chronických infekcií. chorôb. Pokúsme sa prísť na to, čo je táto metóda a aké princípy ležia na jej základe.?

Zložky imunoanalýzy enzýmov - imunitná odpoveď a enzýmová odpoveď

Imunitná odpoveď, čo to je? Čo je to protilátka, antigén?

Čo je imunitná odpoveď? Čo je to antigén?
Najskôr sa pozrime na to, čo sú imunitné odpovede. Imunitné reakcie sú špecifické reakcie väzby antigénu na protilátku za vzniku imunitného komplexu. Čo to znamená? Na povrchu každej bunky ľubovoľného organizmu sa nachádzajú špeciálne štruktúry, ktoré sa nazývajú antigény. Antigény sú vo všeobecnosti molekuly, ktoré prenášajú informácie o bunke (napríklad informácie o odznaku u osoby, ktoré označujú základné údaje o tejto osobe).

Jednotlivé a druhové antigény - čo sú to? Prečo sú tieto antigény potrebné??

Existujú jednotlivé antigény, to znamená, že sú vlastné iba tomuto konkrétnemu organizmu. Tieto jednotlivé antigény sú pre všetkých ľudí odlišné, sú si navzájom podobné, ale stále odlišné. Dve rovnaké kópie jednotlivých antigénov v prírode neexistujú!

Druhým hlavným typom antigénov sú špecifické antigény, ktoré sú vlastné každému konkrétnemu typu živého tvora. Napríklad ľudia majú svoj vlastný druhový antigén, spoločný pre všetkých ľudí, myši majú svoj vlastný druhový antigén pre myši atď. Na povrchu každej bunky musí byť prítomný špecifický a individuálny antigén.

Špecifický antigén používajú bunky imunitného systému na rozpoznanie „priateľa alebo nepriateľa“.

Ako dochádza k rozpoznávaniu antigénu?

Imunitná bunka sa viaže na podozrivú bunku a vykonáva identifikáciu presne pomocou individuálneho antigénu. V pamäti imunitnej bunky je „napísané“, ako vyzerá „vlastný antigén“. Ak sa teda antigén podozrivej bunky zhoduje s popisom „jeho vlastný antigén“, znamená to, že táto bunka jeho vlastného organizmu nepredstavuje žiadne nebezpečenstvo. Potom sa imunitná bunka „rozviaže“ a odíde. A ak sa antigén nezhoduje s popisom „vlastného“, potom imunitná bunka identifikuje túto bunku ako „cudziu“, a teda potenciálne nebezpečnú pre celý organizmus. V takom prípade sa imunitná bunka „nerozviaže“, ale začne ničiť nebezpečný predmet. Presnosť tohto imunologického rozpoznávania je úžasná - 99,97%. Neexistujú prakticky žiadne chyby!

Čo je protilátka, imunitný komplex?
Čo je to protilátka?

Protilátka je špeciálna molekula umiestnená na povrchu imunitnej bunky. Je to protilátka, ktorá sa viaže na antigény podozrivej bunky. Ďalej protilátka prenáša informácie do vnútra bunky, kde dochádza k rozpoznávaniu, a prijíma spätný signál dvoch typov, „našich“ alebo „mimozemšťanov“. Keď je signál „vlastný“, protilátka zničí väzbu s antigénom a uvoľní bunku.

Čo je imunitný komplex?
Na signál „mimozemšťan“ je situácia iná. Protilátka nenaruší väzbu s antigénom, ale naopak, vysielaním špecifických signálov spôsobí „zosilnenie“. Biologicky to znamená, že ďalšie protilátky umiestnené v inej časti bunky sa začnú pohybovať do oblasti, odkiaľ pochádza signál nebezpečenstva, a tiež vytvárajú väzbu medzi sebou a zachyteným antigénom. Nakoniec sa zdá, že antigén je obklopený zo všetkých strán a pevne pripojený. Tento komplex antigén + protilátka sa nazýva imunitný komplex. Od tohto okamihu začína využitie antigénu. Teraz nás však nezaujímajú podrobnosti procesu neutralizácie antigénu..

Typy protilátok (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Protilátky sú proteínové štruktúry, ktoré majú chemický názov, ktorý sa používa ako synonymum pre slovo protilátka. Takže protilátky = imunoglobulíny.

Existuje 5 typov imunoglobulínov (Ig), ktoré sa viažu na rôzne typy antigénov na rôznych miestach ľudského tela (napríklad na koži, slizniciach, v krvi atď.). To znamená, že protilátky majú deľbu práce. Tieto imunoglobulíny sa nazývajú písmená latinskej abecedy - A, M, G, D, E a označujú sa takto - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

V diagnostike sa používa iba jeden typ protilátky, ktorý je pre detegovaný mikrób najšpecifickejší. To znamená, že k väzbe tohto typu protilátok na detegovaný antigén vždy dôjde. Najčastejšie sa používajú IgG a IgM.

Práve tento princíp imunitnej odpovede (jedinečná presnosť a špecifickosť rozpoznávania určovaného biologického objektu) je základom enzymatického imunotestu. Vďaka vysokej presnosti protilátok pri rozpoznávaní antigénov je presnosť celej metódy enzýmového imunotestu tiež najvyššia..

Enzymatická reakcia

Aká je enzymatická reakcia? Čo je to afinita, substrát a reakčný produkt?
Prejdime k úvahe o enzymatickej reakcii pri práci metódy enzýmovej imunotesty.

Čo je to enzymatická reakcia?

Enzymatická reakcia je chemická reakcia, pri ktorej sa jedna látka prevádza enzýmom na inú látku. Látka, na ktorú enzým pôsobí, sa nazýva substrát. A látka, ktorá sa získava v dôsledku pôsobenia enzýmu, sa nazýva reakčný produkt. Zvláštnosť enzymatickej reakcie je navyše taká, že určitý enzým pôsobí iba na určitý substrát. Táto vlastnosť enzýmu rozpoznať „svoj“ substrát sa nazýva afinita.

Každý enzým teda vykonáva iba jednu špecifickú reakciu. V biologickom svete je známe veľké množstvo enzýmov, ako aj enzymatické reakcie. Pri enzýmovej imunoteste sa používa iba niekoľko enzymatických reakcií - nie viac ako 10, pričom sa zvolili také enzymatické reakcie, ktorých produktom sú zafarbené látky. Prečo by mali byť produkty enzymatickej reakcie zafarbené? Pretože na výpočet koncentrácie látky z farebného roztoku existuje jednoduchá chemická metóda - kolorimetria.

Metóda kolorimetrie - podstata a princíp

Kolorimetria využíva meranie hustoty farieb roztoku a koncentrácia látky sa počíta z hustoty farieb, zatiaľ čo špeciálny prístroj - kolorimeter - meria hustotu farieb roztoku. V kolorimetrii sú možné dva varianty závislosti hustoty farieb na koncentrácii látky - ide o priamu úmernú závislosť alebo nepriamo úmernú závislosť. Pri priamom proporčnom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým intenzívnejšia je farebná hustota roztoku. Pri nepriamo úmernom pomere platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým nižšia je farebná hustota roztoku. Po technickej stránke sa to stane takto: odoberie sa niekoľko roztokov so známou koncentráciou látky, zmeria sa hustota týchto roztokov, vynesie sa graf závislosti závislosti hustoty od farby (kalibračný graf).

Ďalej sa zmeria farebná hustota roztoku, ktorého koncentrácia sa stanoví a podľa kalibračného grafu sa zistí hodnota koncentrácie zodpovedajúca úrovni nameranej farebnej hustoty roztoku. deje sa automaticky.

V enzýmovej imunoteste sa najčastejšie používajú tieto enzýmy: peroxidáza, alkalická fosfatáza, avidín.

Ako sa kombinujú imunologické a enzymatické reakcie v enzýmovom imunoteste? Teraz sa obrátime na zváženie skutočného imunotestu s enzýmom. Aké fázy zahŕňa a čo sa deje v priebehu týchto reakcií? Imunologický test môže byť priamy a nepriamy.

Priamy enzýmovo viazaný imunosorbentný test - štádiá

V priamom enzýmovo viazanom imunosorbentnom teste sa používajú protilátky proti detegovateľnému antigénu v kombinácii so špecifickou značkou. Táto špecifická značka je substrátom enzymatickej reakcie..

Pripojte antigény k povrchu jamky a skombinujte antigén s protilátkou

Ako funguje priamy enzýmový imunotest? Odoberá sa biologický materiál (krv, odreniny zo slizníc, škvrny) a umiestňuje sa do špeciálnych otvorov. Biologický materiál sa nechá v jamkách 15 až 30 minút, aby antigény mohli prilipnúť na povrch jamiek. Ďalej sa do týchto jamiek pridávajú protilátky proti detegovanému antigénu. To znamená, že detekciou antigénov, napríklad syfilisu, sa pridávajú protilátky proti antigénom syfilisu. Tieto protilátky sa získavajú priemyselne a laboratóriá kupujú hotové súpravy. Táto zmes testovaného materiálu a protilátok sa nechá istý čas (od 30 minút do 4 - 5 hodín), aby protilátky mohli nájsť a naviazať sa na „svoj“ antigén. vzorka antigénov, tým viac protilátok sa na ne naviaže.

Odstránenie „extra“ protilátok

Ako už bolo uvedené, protilátky sa tiež viažu na konkrétnu značku. Pretože sa protilátky pridávajú v nadbytku, nie všetky sa naviažu na antigény, a ak vo vzorke nie je vôbec žiadny antigén, potom sa žiadna protilátka neviaže na požadovaný antigén. Za účelom odstránenia „extra“ protilátok sa obsah jamiek jednoducho vyleje. V dôsledku toho sa odstránia všetky „extra“ protilátky a tie, ktoré sa naviazali na antigény, zostanú, pretože antigény sú „nalepené“ na povrch jamiek. Jamky sa niekoľkokrát prepláchnu špeciálnym roztokom, ktorý umožňuje vymyť všetky „extra“ protilátky.

Enzymatická reakcia - tvorba zafarbenej zlúčeniny

Potom sa začína druhá etapa - enzymatická reakcia. Roztok s enzýmom sa pridá do premytých jamiek a nechá sa 30 až 60 minút. Tento enzým má afinitu k látke (špecifické označenie), na ktorú sa viažu protilátky. Enzým uskutočňuje reakciu, v dôsledku ktorej sa táto špecifická značka (substrát) zmení na sfarbenú látku (produkt). Potom sa kolorimetricky zistí koncentrácia tejto zafarbenej látky. Pretože toto špecifické označenie je spojené s protilátkami, znamená to, že koncentrácia zafarbeného reakčného produktu sa rovná koncentrácii protilátok. A koncentrácia protilátok sa rovná koncentrácii antigénov. Na základe analýzy teda dostaneme odpoveď, aká je koncentrácia detekovaného mikróbu alebo hormónu.

Takto prebieha priamy enzýmový imunotest. Dnes sa však častejšie používa test nepriameho enzýmu viazaného na imunosorbent, pretože citlivosť a presnosť nepriameho testu je vyššia ako priameho testu. Prejdime teda k nepriamemu enzýmovému imunotestu.

Nepriamy enzýmový imunotest - štádiá

Pri nepriamom enzýmovom imunoteste existujú dva stupne. V prvom štádiu sa používajú neznačené protilátky na detegované antigény a v druhom stupni sa používajú označené protilátky k prvým neznačeným protilátkam. To znamená, že nejde o priamu väzbu protilátky na antigén, ale o dvojitú kontrolu: väzbu protilátok na antigén, po ktorej nasleduje väzba druhých protilátok na komplex protilátka + antigén. Protilátky pre prvé štádium sú spravidla myšie a pre druhé kozie.

Fixácia antigénov na povrchu jamky a väzba antigénu na neznačenú protilátku
Rovnako ako pre priamy enzýmový imunotest sa odoberá biologický materiál - krv, odreniny, škvrny. Biologický materiál, ktorý sa má študovať, sa zavedie do jamiek a nechá sa 15 až 30 minút prilipnúť antigény k povrchu jamiek. Potom sa do jamiek zavedú neznačené protilátky proti antigénom a nechajú sa na určitý čas (1 až 5 hodín), aby sa protilátky naviazali na „svoje“ antigény a vytvorili imunitný komplex (prvý stupeň). Potom odstráňte „extra“ nenaviazané protilátky vyliatím obsahu jamiek. Prepláchnite špeciálnym roztokom, aby sa úplne odstránili všetky nenaviazané protilátky.

Väzba značenej protilátky na komplex antigén + neznačená protilátka
Potom vezmite druhé protilátky - označené, pridajte do jamiek a opäť nechajte nejaký čas - 15 - 30 minút (druhá fáza). Počas tejto doby sa značené protilátky viažu na prvý - neoznačený a tvoria komplex - protilátka + protilátka + antigén. Značené aj neznačené protilátky sa však do jamiek pridávajú v nadbytku. Preto je potrebné opäť odstrániť „extra“, už označené protilátky, ktoré sa neviazali na neoznačené protilátky. Za týmto účelom zopakujte postup nalievania obsahu jamiek a opláchnutie špeciálnym roztokom.

Enzymatická reakcia - tvorba zafarbenej zlúčeniny
Potom sa zavedie enzým, ktorý uskutoční reakciu transformácie „štítku“ na sfarbenú látku. Farba sa vyvíja do 5-30 minút. Potom sa uskutoční kolorimetria a vypočíta sa koncentrácia zafarbenej látky. Pretože koncentrácia zafarbenej látky sa rovná koncentrácii označených protilátok a koncentrácia označených protilátok sa rovná koncentrácii neznačených protilátok, ktorá sa zase rovná koncentrácii antigénu. Takto získame koncentráciu detegovaného antigénu.
Táto dvojitá kontrola vo forme použitia dvoch typov protilátok umožnila zvýšiť citlivosť a špecifickosť metódy enzýmového imunotestu. Napriek predĺženiu času analýzy a zahrnutiu ďalších etáp sú tieto straty kompenzované presnosťou výsledku. Z tohto dôvodu je v súčasnosti drvivou väčšinou metód enzýmovej imunotestu nepriama enzýmová imunotest.


Aké choroby sa zisťujú pomocou enzýmovej imunotesty?

Poďme ďalej zvážiť, aké choroby a aké biologicky aktívne látky sa zisťujú metódou enzýmového imunotestu. Látky zistené metódou ELISA sú uvedené v tabuľke.

Popis diagnózy STD: enzýmová imunotest (analýza ELISA)

Zoznam dostupných diagnostických techník sa v posledných desaťročiach rýchlo rozširuje, diagnostikári sa snažia spojiť výhody všetkých predchádzajúcich analýz do nových metód a zbaviť sa všetkých svojich predošlých nevýhod.

V poslednej dobe sa čoraz častejšie v zozname diagnostických postupov objavuje enzýmová imunotest - moderný a pomerne nový test, o ktorom bežný človek, ktorý nie je spájaný s medicínou, vie len málo. Napriek tomu táto technika rýchlo rozširuje rady svojich prívržencov medzi kvalifikovaným zdravotníckym personálom. Čo to je a v akých prípadoch by sa malo používať, môžete to skúsiť zistiť oboznámením sa s jeho vlastnosťami a hlavnými charakteristikami.

Podstata metódy

Enzýmová imunotest je prístrojová a laboratórna technika založená na molekulárnej reakcii „antigén-protilátka“, ktorá umožňuje detekciu špecifických proteínov v biologických materiáloch (vzorky na výskum). Tieto proteíny môžu byť enzýmy, rôzne mikroorganizmy (vírusy, baktérie, huby), prvoky atď..

Po objavení metódy dostal meno ELISA test, ktorý nemá nič spoločné s menom objaviteľov, ale je skratkou celého názvu v anglickej verzii - enzýmovo viazaný imunosorbentný test. Lekári na celom svete používajú toto meno, niektorí lekári v rusky hovoriacich krajinách tak nazývajú aj tento typ výskumu.

Hlavným princípom metódy je molekulárna reakcia „antigén-protilátka“..

Antigén je akákoľvek cudzia molekula, ktorá sa dostala do ľudského tela ako súčasť patogénneho mikróbu. Antigény sú zvyčajne proteínové molekuly. Okrem mikroorganizmov môžu byť takýmto „cudzincom“ bunky krvi niekoho iného, ​​ktoré sa nezhodujú v skupine alebo v Rh faktore.

V reakcii na vniknutie takéhoto antigénu sa v tele spustí imunitná odpoveď, ktorá je zameraná na ochranu pred akýmikoľvek cudzími molekulami. Je to spôsobené syntézou špeciálnych látok imunitného systému - protilátok (imunoglobulínov). Každá protilátka je vhodná len pre konkrétny antigén a neutralizuje patogénneho „cudzinca“ a viaže sa s ním na jeden komplex. Je to proces takejto väzby, ktorý sa nazýva reakcia „antigén-protilátka“..

Druhy protilátok

Všetky protilátky (imunoglobulíny) sú rozdelené do 5 typov podľa toho, v akom štádiu imunitnej odpovede sa objavia:

  • Trieda M (IgM). Nárast takýchto imunoglobulínov sa pozoruje v priebehu niekoľkých prvých dní po zavedení infekcie alebo iného patogénneho činidla. Asi po 6 týždňoch sa začnú rozpúšťať a miznúť..
  • Trieda G (IgG). Syntetizujú sa v druhom štádiu boja proti chorobe. Po úplnom vylúčení cudzích molekúl sú naďalej prítomné v krvi v malom množstve, aby poskytli imunitu v prípade opätovnej infekcie.
  • Trieda A (IgA). Takéto imunoglobulíny sú zodpovedné za ochranné funkcie slizníc tela, cez ktoré je najjednoduchšie preniknúť patogénnym prvkom, pretože slizničný epitel je oveľa tenší a jemnejší ako bežná pokožka..
  • Trieda E (IgE). Tieto špecifické globulíny priamo pôsobia proti parazitickým infekciám, ktoré pôsobia na ľudské telo. Objavujú sa bez ohľadu na to, ktorá orgánová sústava je parazitmi ovplyvnená..
  • Trieda D (IgD). Táto trieda sa vždy nachádza aj u zdravých ľudí. U detí do 10 rokov sa postupne zvyšuje, potom sa jeho množstvo pri absolútnom zdraví nemení. Ak sa indikátor zvýši nad normu, môže to znamenať nástup tehotenstva, astmu, imunodeficienciu atď..

Pre diagnostiku ELISA sú najdôležitejšie hladiny imunoglobulínov IgG, IgM a IgA. Podľa ich kreditov môžete zistiť, či človek ochorel už predtým alebo sa nakazil nedávno, či si vytvoril imunitu alebo či je jeho telo bezbranné proti patológii..

Výhody a nevýhody enzýmového imunotestu

V súčasnosti je ELISA jednou z najpresnejších a najcitlivejších metód. Prijali ju odborníci v rôznych oblastiach medicíny a pokračuje v rozširovaní jej rozsahu.

Výhody metódy

  • Vysoká presnosť prijatých údajov.
  • Citlivosť (umožňuje detekovať požadovanú látku aj pri minimálnej prítomnosti patogénu vo vzorke).
  • Možnosť diagnostiky v prvých dňoch choroby alebo v inkubačnej dobe.
  • Rýchlosť získavania údajov v porovnaní s inými metódami podobnej presnosti.
  • Vysoká automatizácia procesu a minimálna ľudská účasť, čo znižuje chyby umelca.
  • Získanie údajov o štádiu patologického procesu a účinnosti vybranej terapie.
  • Bezbolestnosť a nízka invazívnosť pri výbere materiálu.

Nevýhody metódy

  • Vo väčšine prípadov vám umožňuje určiť reakciu tela na patogénne činidlo, a nie samotný patogén.
  • Pred štúdiou musí byť podozrivá choroba presne známa, pretože test je veľmi špecifický.
  • Pravdepodobnosť falošných indikátorov spôsobených technickými problémami, užívaním liekov, súčasnou prítomnosťou niekoľkých chronických chorôb alebo metabolických porúch v tele pacienta.
  • Interpretáciu výsledkov by mal robiť iba vysokokvalifikovaný špecialista, pretože na interpretáciu získaných údajov je potrebné mať špeciálne školenie a veľké množstvo lekárskych znalostí v konkrétnej oblasti..
  • ELISA je pomerne zriedkavá analýza, preto sa nevykonáva vo všetkých diagnostických laboratóriách..
  • Metóda je dosť drahá, pretože v laboratóriu musí byť okrem reagencií aj množstvo nákladného vybavenia a vzorky antigénov vyrobené v špeciálnych ústavoch..

V akých prípadoch sa používa enzýmová imunotest?

Kompletný zoznam indikácií na predpisovanie enzýmového imunotestu je veľmi široký a zahŕňa takmer všetky oblasti medicíny.

Najčastejšie sa ELISA používa na nasledujúce účely:

  • identifikácia infekčných chorôb;
  • diagnostika sexuálne prenosných chorôb;
  • stanovenie imunitného stavu alebo jednotlivých autoimunitných chorôb;
  • identifikácia nádorových markerov;
  • stanovenie hormónov.

V prípade infekčných a vírusových ochorení vám technika umožňuje identifikovať nasledujúce patológie:

  • všetky typy vírusovej hepatitídy;
  • Vírus Epstein-Barr;
  • všetky infekcie TORCH;
  • všetky druhy črevných infekcií;
  • HIV;
  • syfilis;
  • väčšina parazitárnych infekcií;
  • helikobakterióza atď..

Okrem toho vám test ELISA umožňuje rýchlo a efektívne určiť stav infarktu, posúdiť reprodukčný potenciál tela, identifikovať alergie, jeho zdroj atď..

Enzýmová imunotest sa používa na klinické skúšky pri vývoji nových liekov a pri hodnotení ich účinku na ľudský organizmus.

Druhy vzoriek a metódy ich výberu na výskum

Najčastejšie je testovacím materiálom pre enzýmovú imunotest krv odobratá z kubitálnej žily pacienta. Odber vzoriek sa vykonáva na prázdny žalúdok, hlavne ráno. Po odbere vzoriek sa tvarované bunky, ktoré interferujú so štúdiou, oddelia a odstránia z krvi, pričom zostane iba sérum.

Pri diagnostikovaní urogenitálnych infekcií sa často stávajú materiálom šmuhy zo slizničných tkanív pohlavných orgánov, hlien z močovej trubice alebo krčka maternice, vzorky z konečníka, odreniny z erózií alebo vredov v oblasti slabín a z iných častí tela. Tampóny sa môžu odoberať z ústnej dutiny, ako aj z nosohltanu.

Niekedy sa v pôrodníckej a gynekologickej praxi počas tehotenstva používa na stanovenie stavu plodovej vody enzýmová imunotest. V takom prípade sa z plodovej vody stane vzorka. Za týmto účelom sa odoberie malé množstvo tekutiny prepichnutím plodového mechúra dlhou ihlou. Všetky manipulácie sa vykonávajú sterilným prístrojom, aby sa minimalizovali možné riziká..

Často sa z materiálu stáva mozgovomiechový mok alebo serózny mok. Stáva sa to pri lokálnej anestézii, ktorá sa podáva injekčne.

Na objasnenie toho, aký typ materiálov je potrebný na enzýmovú imunotest, by mal urobiť špecialista, ktorý zasiela štúdiu. Vzorky sa často odoberajú z niekoľkých typov naraz alebo z rôznych miest. Lekár, ktorý vydáva odporúčanie na tento typ vyšetrenia, by mal pacienta informovať aj o príprave na dodanie biomateriálu..

Príprava na enzýmovú imunotest

Na zvýšenie presnosti údajov získaných po vykonaní enzýmovej imunotesty by mala byť príprava na výber materiálu nasledovná:

  • vylúčiť antibiotiká, antivírusové a antimykotické lieky 10 dní pred štúdiou;
  • za deň je potrebné vylúčiť alkohol, fajčenie a užívanie drog;
  • v rovnakom období by sa malo zabrániť fyzickému prepätiu;
  • varovať predpisujúceho lekára o všetkých liekoch, ktoré pacient užíva;
  • oznámte to lekárovi v prípade tehotenstva alebo podozrenia na tehotenstvo.

Najlepšie je, ak sa materiály na testovanie zhromažďujú ráno nalačno..

Ak je diagnóza zameraná na zistenie stavu hormonálneho zázemia, je dôležité zabezpečiť si deň predtým pokojný stav a vyhnúť sa nervovému napätiu. U žien je darovanie krvi pre hormóny jasne definované obdobím mesačného cyklu, ktoré lekár oznámi v čase objednania..

2-3 dni pred výberom materiálu musíte z ponuky vylúčiť vyprážané a mastné a pred testovaním na hepatitídu nejedzte citrusové plody a iné oranžové a žlté ovocie a zeleninu..

Dekódovanie výsledkov enzýmovej imunotesty

Výsledok kvalitatívnej štúdie je zvyčajne označený znakmi „+“ (nájdené) alebo „-“ (nenájdené).

Na základe prítomnosti alebo neprítomnosti určitých skupín imunoglobulínov možno vyvodiť nasledujúce závery:

  • JgM (-), JgG (-), JgA (-) - imunita voči chorobe úplne chýba (telo sa s týmto typom antigénu nikdy predtým nestretlo);
  • JgM (-), JgG (+), JgA (-) - predtým došlo ku kolízii s týmto antigénom alebo s vakcínou;
  • JgM (+), JgG (- / +), JgA (- / +) - akútny patologický proces (s najväčšou pravdepodobnosťou primárny);
  • JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proces chronického priebehu;
  • JgM (+), JgG (+), JgA (+) - relaps;
  • JgM (-) - štádium zotavenia.

Kvantitatívne hodnoty majú veľkú informačnú záťaž, ale interpretovať ich môže iba ošetrujúci lekár na základe predchádzajúcich indikácií, veku pacienta a noriem pre každú konkrétnu chorobu. Z tohto dôvodu nemôžete sami vyhodnotiť výsledky..

Ako dlho trvá čakanie na výsledky

Táto technika má veľa odrôd, v závislosti od toho, od ktorého času je určený čas na získanie údajov. Priemerná doba trvania diagnostiky ELISA je 4 až 6 hodín, čo vám umožní podať výsledky hneď nasledujúci deň.

Najdlhšie metódy trvajú napríklad 10 dní napríklad v prípade infekcie HIV.

V prípade urgentnej potreby je možné použiť expresné metódy, pri ktorých je odpoveď doručená do 1-2 hodín.

Kde získam testovanie ELISA?

Pretože vybavenie pre tento typ diagnostiky je dosť drahé, nie všetky laboratóriá si ho môžu kúpiť. Okrem toho majú testy obsahujúce špecifické antigény obmedzenú dobu použiteľnosti (zvyčajne asi 1 rok), a preto je potrebné ich neustále aktualizovať..

Z týchto dôvodov štátne lekárske inštitúcie nie vždy majú laboratóriá ELISA. Najčastejšie musíte ísť do veľkých súkromných lekárskych alebo veľkých diagnostických centier.

Na uskutočnenie štúdie ELISA musí mať laboratórium špeciálne povolenie a zamestnanci a laboranti musia absolvovať špeciálne školenie..

Najčastejšie odporúča konkrétne diagnostické centrum alebo laboratórium lekár, ktorý pacienta pošle na vyšetrenie.

Náklady na enzýmovú imunotest

Cena za túto štúdiu závisí od regiónu krajiny a od úrovne kliniky poskytujúcej službu. V Moskve minimálna cena za stanovenie jedného antigénu začína na 700 rubľov. Ak je potrebné identifikovať niekoľko imunoglobulínov naraz, cena sa zhrnie.

V prípade urgentnej analýzy sa náklady zvyšujú o 150-200 rubľov. pre každý antigén.

Napriek pomerne vysokým nákladom umožňuje enzýmovo viazaný imunosorbentný test urobiť vyšetrenie pacienta čo najinformatívnejšie a najrýchlejšie, čo skracuje čas pred začiatkom liečby a umožňuje rýchlu stabilizáciu stavu človeka..

Toto video predstavuje film „Základy enzýmovej imunotesty“.

Pre Viac Informácií O Cukrovke