Čo je krvný test na ELISA

Vývoj modernej medicíny vo svete diagnostiky neprestáva udivovať jej dosiahnutými výsledkami a lekár teraz nemusí robiť domnienky o pravdepodobnej diagnóze, opiera sa iba o nepriame príznaky. Vytvorenie a zavedenie do sveta laboratórneho výskumu enzýmového imunosorbentného testu (ELISA) vám umožňuje rýchlo a presne určiť nielen prítomnosť patogénu, ale aj mnoho ďalších charakteristík choroby..

História vzniku a vývoja IFA

Táto metóda krvných testov sa v praktickej medicíne začala používať už v polovici minulého storočia - niekde v 60. rokoch. Jej pôvodným účelom bol vedecký výskum v oblasti histológie, ktorý sa obmedzil na hľadanie a štúdium bunkovej antigénnej štruktúry biologických druhov. Krvný test ELISA je založený na interakcii príbuzných antigénov (AG) a špecifických protilátok (AT) s tvorbou komplexu „antigén-protilátka“ stanoveného enzýmom..

Tento jav podnietil vedcov k rozhodnutiu, že túto metódu je možné použiť na rozpoznanie proteínových zlúčenín rôznych tried, ktoré sa tvoria v krvnom sére, keď sa patogén dostane do tela. Vďaka svojej priamej účasti na fungovaní imunitného systému sa tieto zlúčeniny nazývajú imunoglobulíny (Ig, Ig) a objav bol najväčším prielomom v laboratórnej diagnostike..

Zároveň sa táto vysoko citlivá metóda začala aktívne používať až v 80. rokoch a bola k dispozícii iba vo vysoko špecializovaných lekárskych inštitúciách. Úplne prví mohli používať analyzátory enzýmovej imunotesty na staniciach a v centrách transfúzie krvi, pohlavných a infekčných lekárskych ústavoch. Bolo to kvôli rýchlemu šíreniu „moru 20. storočia“ - AIDS, a boli potrebné urgentné diagnostické a terapeutické opatrenia..

Možnosti techniky

Oblasť použitia krvného testu na ELISA je dosť široká - v súčasnosti si nemožno predstaviť, aké komplikované by bolo hľadanie príčiny mnohých chorôb. Takýto výskum sa dnes používa takmer vo všetkých medicínskych odboroch, dokonca aj v onkológii. Aj keď je to pre neinformovaných ťažké pochopiť, v niektorých prípadoch bolo po jeho uskutočnení možné zachrániť životy pacientov, ktorí v počiatočných štádiách objavili nádor..

V moderných diagnostických centrách nie sú laboratórne vyšetrenia reprezentované iba nádorovými markermi - sú vybavené pôsobivým arzenálom panelov na vykonávanie tejto diagnózy. S ich pomocou možno určiť veľa patologických stavov, ako sú hormonálne abnormality a infekčné procesy rôzneho pôvodu..

Okrem toho vykonanie a dekódovanie krvného testu ELISA umožní sledovať účinok liekov na telo chorého človeka a dokonca aj zvieraťa. Posledná zmienka je široko používaná na veterinárnych klinikách, pomáha udržiavať zdravie našich domácich miláčikov alebo živiteľov rodiny a poskytuje stabilný prísun mäsa, mliečnych výrobkov a vajec, ktoré sú v strave nenahraditeľné..

V dôsledku odberu iba niekoľkých mililitrov venóznej krvi a jej diagnostiky pomocou metódy ELISA bude lekár po opise výskumných materiálov schopný určiť:

  • hormonálny stav vrátane biologicky aktívnych látok pohlavných žliaz a štítnej žľazy, ako aj nadobličiek;
  • prítomnosť bakteriálnych a vírusových infekcií (hepatitída B a C, syfilis, herpes, chlamýdie, tuberkulóza, mykobunka a ureaplasmóza, HIV, TORCH) a iné choroby tohto druhu;
  • príznaky vitálnej aktivity patogénov patologického procesu, ktoré skončili zotavením a prešli do štádia tvorby protilátok (imunitná odpoveď).

Takéto komplexy sú oveľa ľahšie rozpoznateľné a eliminované imunitnými bunkami. Zvyškové účinky vo forme protilátok sú v mnohých prípadoch obsiahnuté v krvi po celý život, čo prakticky znižuje riziko opätovnej infekcie na nulu.

Odrody imunoglobulínov

Existuje niekoľko typov protilátok a každá z nich sa v určitom štádiu podieľa na procese imunitnej odpovede. Napríklad imunoglobulíny triedy M (IgM) sú prvé, ktoré sa tvoria v reakcii na vstup hypertenzie do tela. Ich najvyššia miera sa pozoruje v prvých dňoch choroby..

Potom imunitný systém vypustí do plazmy Ig triedy Ig (IgG), ktoré sú zodpovedné za úplné zničenie antigénov a zotavenie pacienta. Neskôr sú naďalej v krvi, a tým sa pripravuje imunita na opakované zasiahnutie identického patogénu. Takto funguje očkovanie. So zavedením oslabených antigénov patologických mikroorganizmov sa objavuje a zostáva v plazme veľa imunoglobulínov..

A následne, ak dôjde k patogénnemu kontaktu, rýchlo sa vyrovnajú s infekciou a zachránia telo pred zdravotnými hrozbami. IgA je koncentrovaný vo veľkom množstve v slizniciach a blokuje vstup patogénnych vírusov a baktérií do tela. IgE sú zodpovedné za ničenie parazitárnych infekcií a na imunitnej reakcii sa podieľa aj mnoho ďalších imunoglobulínov.

Hlavnými objektmi záujmu pre laboratórnu diagnostiku sú triedy Ig M, G a A. Podľa úrovne ich koncentrácie môžete určiť štádium ochorenia a zistiť, aké infekčné choroby mal človek v živote. Môžete napríklad skontrolovať, či sa v minulosti vyskytli kiahne alebo rubeola. Lekár, aby zistil, či je v tele pacienta prítomný určitý druh AT alebo AH, alebo či je v ňom koncentrácia nejakého hormónu, nie je potrebné predpisovať viacnásobné laboratórne vyšetrenia - stačí napísať odporúčanie na ELISA.

Podstata techniky

Enzýmovo viazaný imunosorbentný test na parazity a iné mikroorganizmy - škodcovia na zdraví tela umožňujú nielen zistiť prítomnosť patogénov, ale aj povedať o ich počte v krvnej plazme pacienta. Takáto štúdia teda umožňuje kvalitatívnu aj kvantitatívnu analýzu patogénnych mikroorganizmov nachádzajúcich sa v sére..

Úroveň koncentrácie patogénu významne ovplyvňuje vývoj infekcie a rýchlosť zotavenia, preto sa kvalitatívne hodnotenie považuje za nemenej dôležité ako kvantitatívne. Pri liečbe detí a dospelých sa jej nedostáva ani zďaleka poslednej úlohy. Ako je to však možné, že ELISA je schopná rozpoznať také široké spektrum mikroorganizmov, ktoré parazitujú na tele ľudí a zvierat, spôsobujú škody a znižujú kvalitu života??

Metodika výskumu je založená na niekoľkých možnostiach (priamych a nepriamych - konkurenčných a nekonkurenčných) plnenia zadaných úloh, pričom každá z nich je určená na konkrétne účely. Tento prístup umožňuje cielené vyhľadávanie a v čo najkratšom čase zistiť príčinu konkrétnej patológie. Na detekciu Ig rôznych tried tried sa používa 96-jamková doštička (polystyrénový panel) a v jej jamkách sa nachádzajú sorbované rekombinantné proteíny. Hrajú úlohu antigénov a v počiatočnom štádiu sú v tuhej fáze.

Keď sa dostane do jamky s krvnou plazmou, antigény alebo protilátky identifikujú predmet v súvislosti s jeho orientáciou a tvoria komplex (AG - AT). Táto tvorba je fixovaná enzýmovou zlúčeninou (konjugát), ktorá sa následne prejaví ako zmenené sfarbenie jamky. ELISA sa vyrába na špecifických testovacích systémoch vyrábaných v špecializovaných laboratóriách a vybavených úplnou sadou reagencií.

Túto analýzu je možné vykonať na podložkách - podložkách a údajoch spektrofotometra, ktoré však vyžadujú manuálnu prácu. Samozrejme, pre laboratórneho asistenta je niekoľkonásobne pohodlnejšie a rýchlejšie vykonávať všetky manipulácie na plne automatizovaných zariadeniach. Pri ich použití sú pracovníci laboratória zbavení veľkého množstva monotónnej činnosti - umývania, instilácie a zvyšku rutiny, ale nie všetky lekárske inštitúcie si môžu dovoliť také drahé vybavenie

Interpretácia výskumných materiálov je výlučne v kompetencii laboratórneho diagnostika - iba jemu môžu byť povedané výsledky o špecifikách a jemnostiach priebehu ochorenia. V takom prípade musí lekár vziať do úvahy možnosť získania falošne negatívnych alebo falošne pozitívnych odpovedí..

Dekódovanie materiálov

Výsledkom vysoko kvalitného enzýmového imunotestu by mal byť jednoznačný záver - požadovaný mikroorganizmus sa v tejto vzorke krvi našiel alebo nenašiel. Kvantitatívna analýza ukáže hladinu koncentrácie a môže byť vyjadrená dvoma spôsobmi - hodnotou v číslach alebo počtom znamienok „+“..

Analyzované ukazovatele

Počas výskumu sa vykonáva dôkladná štúdia hlavných imunoglobulínov zapojených do imunitnej odpovede, ako napríklad:

  • IgM - detekcia tejto triedy znamená vývoj akútnej formy infekčného ochorenia. Negatívnym výsledkom pri hľadaní IgM môžu byť jednak dôkazy o neprítomnosti požadovaného patogénu, jednak o prechode choroby do chronického priebehu..
  • IgA - stanovenie tejto triedy pri absencii IgM vo väčšine prípadov, signál o chronickej alebo latentnej forme vývoja infekčnej choroby.
  • IgM a IgA (súčasná prítomnosť) - pozitívne výsledky pre oba typy naznačujú samotný vrchol akútnej formy patológie.
  • IgG - jeho prítomnosť naznačuje transformáciu choroby na chronickú formu alebo po zotavení a tvorbe imunity voči určenému činiteľovi.

Vznik a akumulácia určitej triedy IS nastáva v rôznych časových fázach. Napríklad napríklad IgM sa objaví prvý, asi 5 dní po zasiahnutí patogénu. IG zostávajú v krvi asi 5-6 týždňov a potom postupne miznú. V súčasnosti sú k dispozícii na stanovenie pomocou ELISA. Približne 3 - 4 týždne po nástupe ochorenia sa objaví IgG, ktorý môže následne zostať niekoľko mesiacov. Ale v analýze sa nie vždy nájdu.

IgA sa tvoria v krvi za obdobie 2 - 4 týždňov, pričom 20% z nich je obsiahnutých v sére a 80% z nich vylučuje sliznice. Spravidla tieto imunoglobulíny zmiznú v priebehu 2 - 9 týždňov, čo naznačuje zničenie patogénu a zotavenie pacienta. Ak ELISA stále ukazuje na prítomnosť IgA, potom to signalizuje prechod procesu do chronickej formy..

Možnosti výsledkov analýzy

V závislosti od získaných údajov môžu byť odpovede ELISA vydané vo formulári vo forme tabuľky s úplným zoznamom všetkých AT a AG a s uvedením pozitívnej alebo negatívnej reakcie. V určitých situáciách sa zobrazí kvantitatívna hodnota - výrazne pozitívny, pozitívny, slabo pozitívny alebo negatívny výsledok. Druhá možnosť označuje množstvo protilátok obsiahnutých v študovanej vzorke krvi.

Okrem vyššie uvedených hodnôt sa v procese ELISA skúma ďalší kvantitatívny parameter - index avidity AT, počítaný ako percento. Ukazuje, ako dlho choroba trvá - to znamená, čím vyšší je indikátor, tým viac sa vyvinie patológia.

Alternatívna metóda ELISA

Enzýmovo viazaný imunosorbentný test je pomerne známa a bežná diagnóza. Možno niektorí o tom nikdy nepočuli, ale existuje iná verzia tejto štúdie, ešte menej známa širokému okruhu ľudí, v ktorej sa neodoberá krv. Táto technika sa nazýva analýza výkalov pre skrytú krv a v mnohých prípadoch vám umožňuje vyhnúť sa ďalším vyčerpávajúcim postupom, ktoré sú tiež sprevádzané nepríjemnými pocitmi..

Test ELISA na skrytú krv (molekuly hemoglobínu) umožňuje detekovať krvácanie z tráviaceho systému, a to aj bezvýznamné, ktorého príznaky v stolici pacienta, ako sa hovorí, nemožno zistiť voľným okom. Enzýmovo viazaný imunosorbentný test v ľudských výkaloch v krátkom čase dokáže preukázať peptický vred, polypózu, divertikulózu, nádory, ktoré v počiatočných štádiách nie sú sprevádzané určitými príznakmi..

K dnešnému dňu boli vytvorené tisíce odrôd systémov na testovanie pomocou enzýmovej imunotesty, ktoré poskytujú príležitosť nájsť AT a AG s obrovským zoznamom patológií. Preto sa táto analýza používa takmer vo všetkých odvetviach medicíny pre každú vekovú kategóriu. A absolútna neškodnosť vám umožňuje uchýliť sa k nej tak počas tehotenstva, ako aj pri diagnostike oslabených pacientov.

Analýza ELISA: čo to je? prečo je to potrebné? klady a zápory metódy

Analýza ELISA - čo to je? Celý názov tejto diagnostickej metódy sa nazýva enzýmovo viazaný imunosorbentný test a je založený na stanovení protilátok rôznych tried alebo imunoglobulínov, ktoré sú produkované ľudským telom, v periférnej krvi..

V praxi lekára je analýza ELISA veľmi dôležitá, keď je potrebné diagnostikovať infekčnú patológiu. Táto analýza ukazuje nielen prítomnosť infekčného ochorenia, ale aj štádium patologického procesu. Tiež nielen vo vzťahu k patogénu je indikovaná metóda ELISA: používa sa na diagnostiku alergických stavov. Tento test umožňuje identifikovať problémy v imunitnom systéme, pri mnohých ochoreniach krvotvorného systému, autoimunitných a iných poruchách.

Prečo je potrebné IFA?

Všetci vedci sa prikláňajú k názoru, že názov „protilátka“ je príliš nešťastný. Stále však odráža jednu dôležitú vlastnosť imunoglobulínov: sú schopné viazať a neutralizovať škodlivé látky a pristupovať k nim ako k „zámku“. Množstvo protilátok v krvi odráža nielen všeobecnú schopnosť tela brániť sa proti infekciám, ale aj schopnosť vytvárať cirkulujúce imunokomplexy, ktoré sa môžu vyskytnúť pri rôznych autoimunitných ochoreniach, napríklad pri reumatoidnej artritíde alebo pri ankylozujúcej spondylitíde..

Komplexy protilátok s antigénom (škodlivý faktor infekčnej povahy) sú výsledkom reakcie tela na zavedenie „outsiderov“. Imunitný systém sa ich preto naučí rozpoznávať, pomocou lymfocytov trénuje imunokompetentné bunky a sú schopné produkovať vysoko špecifické protilátky. Protilátky proti vírusu Epstein sú teda usporiadané inak ako protilátky proti vírusovej hepatitíde C alebo E. coli a anti-HAV alebo protilátky proti vírusu hepatitídy A - inak ako autoprotilátky proti tkanivu chrupavky. Vďaka vysokej špecifickosti a zhode imunoglobulínov s infekčným agens je vysoko cenný taký laboratórny výskum, ako je enzýmovo viazaný imunosorbent..

Po silnom spojení protilátok a antigénov do jedného komplexu (antigén-protilátka) škodlivé faktory strácajú schopnosť poškodiť tkanivá tela a potom sú tieto komplexy neutralizované alebo lýzované fagocytózou neutrofilmi a „trávené“ z tela odchádzajú..

Krvný test ELISA môže ukázať, s akým špecifickým patogénnym faktorom naše telo čelí, v akom štádiu je proces interakcie medzi telom a infekciou. Po ukončení štúdie môže lekár urobiť prognózu s vysokou mierou dôvery, predpísať určité typy liečby a v niektorých prípadoch dokonca určiť dĺžku života pacienta, najmä pri chronických vírusových infekciách, napríklad pri vírusovej hepatitíde C.

Ale v niektorých prípadoch v tele nie sú vôbec žiadne infekčné agens a protilátky „omylom“ napádajú ich vlastné orgány a tkanivá, pretože imunokompetentné bunky dostali nepravdivé informácie. Takéto choroby sa nazývajú autoimunitné a enzýmová imunotest tiež pomáha rozpoznať túto chronickú patológiu a pomáha pri diagnostike.

Viac o imunoglobulínoch

Ľudské telo celkovo produkuje 5 známych tried protilátok, ktoré sa označujú ako Ig (čo znamená imunoglobulíny) a ktoré patria do tried A, M, G, E a D. Všetky z nich majú veľký význam pri interpretácii výsledkov analýzy ELISA. Samozrejme, komplexov je oveľa viac a nie všetky sú stále otvorené. Ale pri diagnostike rôznych chorôb sú najcennejšie prvé tri typy protilátok. Krvný test ELISA využíva čo najviac informácií: okamih, keď sa protilátky objavia v krvi, zmena ich koncentrácie v závislosti od času, doba zmiznutia a typ špecifických protilátok.

Účastníkmi primárneho akútneho infekčného procesu sú teda imunoglobulíny triedy M, ktoré vždy naznačujú akútnu fázu, aj keď je choroba klinicky vymazaná. Typickým príkladom je anicterická forma akútnej vírusovej hepatitídy B alebo C. Enzýmová imunoanalýza na hepatitídu ukáže, že človek má akútnu hepatitídu a príznaky ako bolesť v hypochondriu, sucho v ústach, boľavé kĺby a ďalšie nešpecifické príznaky budú ľahko pochopiteľné.

O niekoľko týždňov neskôr sa tieto protilátky nachádzajú v čoraz miznúcej koncentrácii, ktorá vedie k imunoglobulínom triedy G. Stanovujú sa v krvi mnoho mesiacov a dokonca rokov a naznačujú buď zotavenie, ale potom môžu zostať doživotne a vytvárať silný imunitný systém. To naznačuje silnú ochranu pred patogénnymi antigénmi. Takže sú to protilátky tejto triedy, ktoré robia človeka imunným voči opakovaným prípadom antraxu a moru. Existujú však situácie, keď tieto protilátky nezabraňujú svojim škodlivým účinkom v prítomnosti antigénov. V tomto prípade môžeme hovoriť o zvýšení aktivity chronického procesu..

Pokiaľ ide o IgE, uplatňuje sa pri diagnostike rôznych parazitárnych invázií a alergických stavov. IgD plní pomocnú funkciu: enzýmovo viazaný imunosorbentný test umožňuje jeho použitie pri komplexnej diagnostike bronchiálnej astmy a autoimunitných stavov. Dešifrovanie analýzy ELISA je samozrejme oveľa komplikovanejšie a odborníci - imunológovia môžu povedať oveľa viac. Čo naznačuje, že sa pacient môže nezávisle obrátiť na laboratórium, aby uskutočnil výskum?

Indikácie pre analýzu

Najskôr musíte pochopiť, že takáto analýza neexistuje - „iba krv pre ELISA“. Existuje analýza pre hepatitídu, stáva sa - pre ureaplazmu alebo pre syfilis. Darcovstvo krvi na test ELISA teda možno zacieliť iba „objednávaním“ hľadania požadovanej infekcie. Je to len také nepochopiteľné, prečo darovať krv z žily, nevediac, čo hľadať. Z tohto dôvodu je enzýmový imunotest silným nástrojom, ktorý je dôležitý pri diagnostickom výskume. Túto analýzu môže predpísať iba lekár, pretože cielene hľadá infekciu charakterizovanú týmito príznakmi. Bežný človek si, samozrejme, môže objednať 150 krvných testov metódou ELISA na „všetky infekcie“, čo by však bol neprimeraný a nákladný prístup k diagnostike, ak by sa robili testy na všetko..

Najžiadanejšie vymenovanie týchto testov na nasledujúce choroby a stavy:

Rôzne mikrobiálne a vírusové infekcie, príznaky infekčných chorôb - vyrážka, horúčka, žltačka, opuchnuté lymfatické uzliny, hnačkový syndróm, podozrenie na pohlavne prenosné choroby.

Technika ELISA pomáha pri stanovení ureaplazmy a mykoplazmy, syfilisu a chlamýdií, tuberkulózy a cytomegalovírusovej infekcie, oparu, vírusovej hepatitídy a vírusu Epstein-Barr. V súčasnosti je možné pomocou enzýmového imunotestu overiť asi 500 rôznych infekcií.,

Ak máte podozrenie na helmintickú inváziu a výskyt príznakov ako alergie, eozinofília v krvi, svrbenie, dyspepsia a strata hmotnosti,

Prečítajte si viac o tomto type výskumu v článku „Krvný test na červy a parazity: metódy výskumu, ELISA, komu a ako darovať?“.

Keď sa zistia alergény, ktoré spôsobujú Quinckeho edém, žihľavku, dýchavičnosť a astmatické záchvaty.

V tomto prípade sa zistí špecifický Ig E a existujú celé panely pre alergiu, ktoré pomôžu presne určiť alergén - kalmáre alebo krevety, suché krmivo pre ryby obsahujúce dafnie, domáci prach. Pri pollinóze vám táto metóda umožňuje nájsť presne tie obilniny, kríky alebo stromy, ktoré spôsobujú jarné kýchanie a slzenie očí.,

  • Táto metóda sa zobrazuje v prípade podozrenia na autoimunitné ochorenia, ktoré liečia reumatológovia,
  • Ak existuje podozrenie na rast a aktivitu nádoru,
  • Pri komplexnej diagnostike stavov imunodeficiencie a HIV infekcie,
  • Pri ochoreniach krvi a pri transplantácii, na komplexné posúdenie imunity, napríklad pred transplantáciou pečene alebo obličiek.

Teraz vieme, prečo musíte darovať krv na test ELISA. Zistite, ako sa uskutočňuje táto štúdia.

Ako sa robí analýza?

Klasickým materiálom je venózna krv pacienta. Ale ak je to potrebné, môžete preskúmať širokú škálu tekutín a tkanív: hlien, sliny, cervikálne sekréty, mozgovomiechový mok, sklovité telo oka, obsah pupočnej šnúry a plodovej vody. Je dôležité mať na pamäti, že užívanie rôznych liekov, nadmerná fyzická aktivita, zneužívanie alkoholu môžu výrazne skresliť výsledky testu..

Existuje niekoľko metód, ktoré umožňujú túto analýzu. Najbežnejšou metódou používanou v klinických laboratóriách je fotometrická metóda. V tomto prípade sa používajú látky označené farbou, po reakcii ktorých a po označení komplexu antigén-protilátka sa zmení ich farba. Vďaka tomu sa tiež mení optická hustota roztoku a táto zmena je priamo úmerná koncentrácii detegovaných protilátok. Na meranie týchto odchýlok sa úspešne používajú laboratórne spektrofotometre.

Pre ELISA sa tiež používa fluorometrická metóda, ktorá je založená na fluorescencii. Aj tu sa počíta intenzita fluorescenčných látok, ktoré sa usadili na študovaných vzorkách..

Nakoniec imunologická analýza využíva elektrochemické metódy na stanovenie aktivity enzýmov, ktoré sú špecifickými značkami pre antigény a protilátky. Samotný enzýmový imunotest najčastejšie zahŕňa použitie enzýmov, ako sú alkalická fosfatáza, chrenová peroxidáza a galaktozidáza. Tieto enzýmy sú schopné viazať sa na protilátky alebo antigény a značiť ich vďaka svojej aktivite.

Nevýhody metódy a jej klady

Medzi zjavné „plusy“ patria demokratické náklady na analýzu, možnosť jej skríningu u veľkých skupín obyvateľstva, napríklad pri vyšetrovaní HIV na tehotné ženy. Metóda enzýmovej imunotesty je dosť špecifická a dá sa použiť na kontrolu kvality liečby mnohých chorôb. Je dôležité, aby bola analýza vypracovaná rýchlo, aby bola pre pacienta jednoduchá a bezpečná..

Existuje však veľa nástrah. Pokiaľ teda nie sú zistené imunoglobulíny, neznamená to stopercentnú absenciu choroby. Na pozadí imunodeficiencie telo skutočne nemusí „mať silu“ syntetizovať protilátky. Ak má pacient vážne zlyhanie pečene, potom pečeň jednoducho nedokáže syntetizovať proteín, ktorý je stavebným kameňom protilátok. V tomto prípade sa výsledok nazýva séronegatívny a potvrdenie infekcie sa vyžaduje priamou a najpokročilejšou metódou výskumu - PCR alebo polymerázovou reťazovou reakciou. Na rozdiel od imunosorbentného testu viazaného na enzýmy táto metóda neodhaľuje reakciu tela na infekčný proces (ktorý môže byť chybný alebo úplne chýba), pri použití PCR sa priamo stanoví dedičný materiál alebo sa lokalizuje samotný patogén..

Metóda enzýmového imunotestu môže poskytnúť chybu na pozadí mnohých chronických chorôb a na pozadí imunosupresívnej liečby. V helmintológii a parazitológii existuje zákon: iba detekcia parazita alebo jeho vajíčok je absolútne spoľahlivým spôsobom stanovenia diagnózy. ELISA môže poskytnúť krížové a falošne pozitívne metódy reagujúce na mnoho bežných udalostí v živote pacienta.

Na záver je potrebné povedať, že enzýmovo viazaný imunosorbent je účinný, ale pomocný spôsob laboratórnej diagnostiky mnohých chorôb. Ale v každom prípade by diagnóza mala vychádzať z mnohých faktorov: sťažnosti a anamnéza pacienta, údaje o vyšetrení a ďalšie pomocné a inštrumentálne diagnostické metódy.

ELISA: ako sa robí analýza? Náklady. Dekódovanie výsledkov

Vysoko presné metódy analýzy sú neoddeliteľnou súčasťou modernej medicíny a predovšetkým diagnostiky. Diagnostické metódy dostupné v našej dobe umožňujú včas identifikovať nielen samotnú skutočnosť prítomnosti, ale aj počet parazitov v tele pacienta.

Teraz sa pacientom spravidla ponúka podstúpiť iba jeden test - enzýmovú imunotest.

Aplikácia krvného testu ELISA

Imunoanalýza je vysoko špecializovaný typ analýzy, ktorá sa vykonáva v laboratóriu. Analýza je založená na reakcii tela, ktorá sa bežne označuje ako „antigén-protilátka“..

Metóda analýzy založená na tomto ukazovateli poskytuje presnosť 99%. Toto je najpresnejšia metóda, ktorá je dnes známa. V praxi sa takmer nevyskytli prípady, keď by takáto analýza priniesla falošné výsledky..

Táto metóda umožňuje identifikovať:

  • značný počet infekčných chorôb spôsobených parazitmi;
  • prítomnosť rôznych typov nádorových markerov;
  • v reprodukčnej medicíne - prítomnosť bielkovín, hormónov a peptidov nevyhnutných na posúdenie plodnosti pacienta;

Spoľahlivosť výsledkov skúšky závisí od niekoľkých faktorov:

  • konkrétny druh parazita;
  • počet parazitov v tele;
  • ich miera reprodukcie.

V akých prípadoch sa používa tento typ analýzy??

Enzýmový imunotest sa široko používa pri diagnostike rôznych chorôb. Jeho hlavnou hodnotou je, že vám umožňuje presne identifikovať choroby, ktoré sú bez príznakov.

Ako viete, takéto choroby sú často problematické odhaliť v počiatočnom štádiu, a preto sa musia začať liečiť včas..

Aké choroby sú diagnostikované pomocou enzýmovej imunotesty:

  • onkologické choroby;
  • sexuálne infekcie (HIV, chlamýdie, syfilis, ureaplazmóza, herpes a iné choroby);
  • tuberkulóza, osýpky, toxoplazmóza, hepatitída atď.;
  • hormóny štítnej žľazy;
  • pohlavné hormóny;
  • rôzne autoimunitné poruchy;
  • alergické reakcie a neznášanlivosť na určité potraviny.

Na akých faktoroch je založený test ELISA?

Tento postup pomáha identifikovať:

  • infekcia tela baktériami a vírusmi;
  • bielkovinová báza;
  • helminthické invázie;
  • cudzie telesá.

Postup ELISA sa v skutočnosti skladá z dvoch častí:

  1. imunitná odpoveď;
  2. enzymatická reakcia.

Podstata princípu „antigén-protilátka“ spočíva v tom, že pôvodca choroby alebo cudzieho telesa, to znamená antigén, vstupuje do tela postupne spolu so zdrojom infekcie. Tento proces spúšťa takzvanú imunitnú reakciu určenú na ochranu tela pred cudzími prvkami..

Prejav takejto ochrany závisí od samotného antigénu a od symptómov ním spôsobenej choroby. Táto schéma sa nazýva „antigén-protilátka“.

Pre väčšiu diagnostickú spoľahlivosť sa celý postup enzýmovej imunotesty vykonáva iba v laboratóriách a lekárskych centrách. So vzorkou krvi interagujú rôzne antigény a protilátky.

Na identifikáciu typu a množstva parazitov v tele pacienta sa používa imunoglobulín triedy „A“ a „E“, ktorý reaguje na parazitické invázie.

Takáto analýza by mala odhaliť:

  • IgM;
  • IgA;
  • IgG;

Aká je imunitná odpoveď a ako sa určuje rozpoznávanie antigénu?

Imunitná odpoveď ukazuje biologické väzby v molekulách mikrobiálnych buniek, za prítomnosti ktorých sa vykonáva analýza. Imunitná odpoveď ako taká je iba jednou zo zložiek komplexného programu ELISA, zatiaľ čo druhou zložkou je enzymatická reakcia.

Rozpoznanie antigénu nastáva pri kontakte bunky imunitného systému (imunocytu) s cudzou bunkou. Jednotlivé vlastnosti antigénov slúžia ako prostriedok na rozpoznanie „priateľa alebo nepriateľa“ pre imunitný systém.

Čo sú protilátky?

Protilátka v skutočnosti:

  • Je to len molekula umiestnená na povrchu imunocytu..
  • Táto molekula sa používa na rozpoznávanie cudzích buniek..

K prenosu prijatých informácií o antigéne dochádza na bunkovej úrovni. Spojenie je zničené, ak je bunka imunná, ak nie, telo spustí prirodzenú obrannú reakciu.

Moderná veda pozná 5 tried protilátok, ktoré sa inak nazývajú imunoglobulíny alebo proteínové štruktúry.

Na označenie protilátok sa používajú latinské písmená: A, D, E, G a M..

Vo výsledkoch analýzy vyzerajú tieto označenia takto:

  • IgA;
  • IgD;
  • IgE
  • IgG;
  • IgM.

Imunologický test

Najskôr je potrebné pripraviť špeciálne polystyrénové platne, ktoré obsahujú 96 jamiek. Pred analýzou sú steny každej bunky ošetrené adsorpčným antigénom.

Krvné sérum sa nakvapká do ošetrených buniek. Homológne protilátky a antigény navzájom reagujú a vytvárajú silné väzby. Nepripojené telá sa vymyjú. Potom sa do jamiek pridajú protilátky imunoglobulínu spolu so špeciálne označenými enzýmovými prvkami.

Reagenty sú označené, aby sa uľahčila identifikácia protilátok v analyzovanom sére. Po opláchnutí sa pridá chromogénny prvok, ktorý urýchľuje reakciu a tónuje jamky. Intenzita farby v porovnaní so študovaným enzýmom ukazuje približné percento antigénu vo vzorke krvi.

Technik potom použije optickú tekutinu na:

  • zmerajte koncentráciu protilátok v jamkách;
  • porovnajte získaný výsledok s kontrolnou vzorkou, to znamená štandardom;
  • vypočítajte koncentráciu protilátok pomocou špeciálnej stupnice.

Na analýzu helminthických invázií sa používa špeciálna verzia testovacieho systému s vlastnou sadou ukazovateľov normy a odchýlok od nej.

Príprava na analýzu

Odber vzoriek krvného séra na enzýmovú imunotest sa vykonáva iba v laboratóriu. Odoberajú krv zo žily, odstraňujú odtiaľ prvky, ktoré môžu ovplyvniť proces analýzy a presnosť jej výsledkov. Ráno si urobte rozbor nalačno.

Dekódovanie výsledkov enzýmovej imunotesty

Kvalita a množstvo protilátok naznačuje prítomnosť cudzích prvkov v tele pacienta vrátane patogénov. Rovnaké znaky naznačujú, že v tele sa začal zápalový proces..

Príklad dekódovania výsledkov testu ELISA:

Štádium chorobyIgAIgMIgG
Primárne (2 týždne po infekcii)+--
Primárne (2,5 - 3 týždne od okamihu infekcie)++-
Primárne (3-4 týždne od okamihu infekcie)+++
Exacerbácia chronickej fázy (2 týždne od začiatku exacerbácie)+-+
Chronické+/--+
Minulosť (vyliečená infekcia)--+
ObnovaPo úspešnej liečbe sa titer znížil 2-4-krát-Titer klesol 4-8 krát po 1-1,5 mesiaci po úspešnej liečbe
Výsledok je negatívny---

Samotná kvantitatívna analýza uskutočnená touto metódou ešte neumožňuje presne diagnostikovať chorobu, predpísať priebeh liečby a určiť dávkovanie liekov..

Výhody a nevýhody testu ELISA

Všetky testovacie metódy, aj tie najpokročilejšie a najpresnejšie, majú bohužiaľ okrem svojich výhod aj svoje nevýhody..

Výhody enzýmovej imunotesty:

  • Špecializácia diagnostickej metódy;
  • Zvýšená citlivosť tejto metódy;
  • Aplikácia najnovších technológií.

Citlivosť diagnostickej metódy je veľká pravdepodobnosť nájdenia požadovanej metódy, aj keď je jej koncentrácia v testovacom materiáli extrémne nízka.

Špecifickosť techniky znamená:

    vysoký stupeň spoľahlivosti, to znamená, že nehrozí riziko, že dôjde k nesprávnemu výsledku. Ak je výsledok pozitívny, potom je pacientovi zaručené, že sa nájde presný typ parazita, ktorým trpí;

  • vplyv na výsledok "ľudského faktora", to znamená možných chýb laboranta, sa zníži na nulu, čo tiež prispieva k zvýšeniu presnosti.
  • Možné nevýhody tejto analytickej metódy:

    1. Predpokladá definíciu podstaty choroby, to znamená, že v tomto prípade nie je možné intuitívne „uhádnuť“ správnu diagnózu;
    2. Vysoké náklady na analýzu.

    Porovnanie duodenálneho a priameho enzýmového imunotestu

    Postup ELISA priamo využíva schopnosť protilátok nájsť antigén a vytvárať väzby so značkami. Táto metóda analýzy sa považuje za priemyselnú, čakacia doba na výsledok nie je dlhšia ako hodina.

    Po fermentácii sa objaví špeciálna značka substrátu. Hladina protilátok zodpovedá podielu antigénov v študovanom biomateriáli.

    Existuje aj duodenálna (inak - nepriama) metóda výskumu parazitických invázií, ktorá je napriek vysokej presnosti ELISA široko používaná.

    Imunotest na duodenálny (nepriamy) enzým sa uskutočňuje v 2 fázach:

    1. Najskôr sa značené protilátky porovnajú s požadovanými antigénmi;
    2. Aplikujte označené protilátky na neznačené protilátky nájdené v predchádzajúcom štádiu.

    Takto sa dosahuje dvojitá kontrola antigénov a protilátok, čo zvyšuje spoľahlivosť analýzy.

    Pri nepriamej ELISA v laboratóriu je antigén fixovaný na povrchu jamky, vytvára väzby s neznačenou časťou protilátok..

    Výhody duodenálnej metódy:

    • Dvojitá kontrola študovaného biomateriálu, čo výrazne zvyšuje presnosť;
    • Zvýšená presnosť a konkrétnosť samotnej analytickej metódy.

    Táto metóda však trvá veľa času a vyžaduje množstvo ďalších krokov. Presnosť štúdie je však taká vysoká, že oprávňuje túto nevýhodu. Z tohto dôvodu väčšina lekárov odporúča metódu duodenálnej analýzy..

    Kam ísť, ako dlho čakať a koľko zaplatiť?

    Ak máte všetko potrebné náradie a spotrebný materiál, môžete získať výsledok do 2 dní po doručení. Ak má laboratórium službu expresnej analýzy, môže byť vzorka spracovaná za 3-5 hodín.

    Kde môžem absolvovať test ELISA:

    • v štátnej klinike;
    • na súkromných klinikách.

    Ceny enzýmového imunotestu priamo závisia od cenovej hladiny na konkrétnej klinike, v priemere je jeho cena minimálne 4 000 rubľov.

    Informácie získané z tejto štúdie môžu byť užitočným prínosom pre lekárske vedy, pacient by si však mal pamätať, že keďže náklady na enzýmovú imunoanalýzu sú také vysoké, bolo by rozumnejšie zveriť tento postup spoľahlivej, časom overenej klinike..

    Vládne lekárske inštitúcie bohužiaľ nie sú vždy vybavené najnovšou vedou. Možno nebudú k dispozícii potrebné prístroje na kvalitný odber vzoriek biomateriálu a jeho spracovanie na okresnej klinike.

    Ako je teda enzýmový imunitný test užitočný pre pacienta:

    • umožňuje zistiť helminthickú inváziu v počiatočnom štádiu;
    • v dôsledku toho vám umožňuje začať liečbu včas;
    • stabilita metód umožňuje vykonať analýzu s rovnakou presnosťou u detí i dospelých.

    Enzýmový imunotest preukazuje nielen kvalitatívny, ale aj kvantitatívny faktor, to znamená, že indikuje nielen samotný fakt prítomnosti helmintov v tele pacienta, ale umožňuje aj odhadnúť ich počet..

    Enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA, ELISA). Podstata, princíp metódy a etapy výskumu. Analýza protilátok, triedy protilátok, imunitný komplex.

    V súvislosti s vývojom bunkových technológií, molekulárnej biológie, genetiky, fyziky, chémie a mnohých ďalších špičkových disciplín sa do každodennej praxe zavádzajú nové vysoko presné a špičkové metódy. Tieto interdisciplinárne trendy ovplyvňujú oblasť lekárskych poznatkov a súvisiace oblasti biologických a biochemických problémov. Za posledných desať rokov sa rozšírila a do masovej praxe zaviedla metóda klinickej laboratórnej diagnostiky nazývaná enzýmová imunotest..

    Technológie imunologických enzymatických a rádiologických reakcií sa všeobecne používajú na typizáciu buniek, bunkových kultúr a rôznych tkanív od začiatku 80. rokov 20. storočia. Tieto metódy však boli veľmi namáhavé, nejednotné, štandardizované, čo vo veľkom rozsahu vylučovalo ich použitie na terapeutické a diagnostické účely. Tieto metódy používali iba úzke vedecky náročné a vysoko špecializované laboratóriá..

    S rozvojom technológie, mikrotechnológie, výroby rôznych biopolymérnych materiálov sa však podarilo vyrobiť hotové sady enzýmových imunotestov, ktoré môžu využívať laboratóriá lekárskych inštitúcií so širokým profilom. ELISA sa široko používa na diagnostiku všetkých druhov infekcií (chlamýdie, syfilis, cytomegalovírus, toxoplazmóza, herpes atď.), Akútnych aj chronických, ako aj latentných foriem, ktoré prebiehajú bez klinických príznakov. Táto metóda sa používa aj na kontrolu chronických infekcií. chorôb. Pokúsme sa prísť na to, čo je táto metóda a aké princípy ležia na jej základe.?

    Zložky imunoanalýzy enzýmov - imunitná odpoveď a enzýmová odpoveď

    Imunitná odpoveď, čo to je? Čo je to protilátka, antigén?

    Čo je imunitná odpoveď? Čo je to antigén?
    Najskôr sa pozrime na to, čo sú imunitné odpovede. Imunitné reakcie sú špecifické reakcie väzby antigénu na protilátku za vzniku imunitného komplexu. Čo to znamená? Na povrchu každej bunky ľubovoľného organizmu sa nachádzajú špeciálne štruktúry, ktoré sa nazývajú antigény. Antigény sú vo všeobecnosti molekuly, ktoré prenášajú informácie o bunke (napríklad informácie o odznaku u osoby, ktoré označujú základné údaje o tejto osobe).

    Jednotlivé a druhové antigény - čo sú to? Prečo sú tieto antigény potrebné??

    Existujú jednotlivé antigény, to znamená, že sú vlastné iba tomuto konkrétnemu organizmu. Tieto jednotlivé antigény sú pre všetkých ľudí odlišné, sú si navzájom podobné, ale stále odlišné. Dve rovnaké kópie jednotlivých antigénov v prírode neexistujú!

    Druhým hlavným typom antigénov sú špecifické antigény, ktoré sú vlastné každému konkrétnemu typu živého tvora. Napríklad ľudia majú svoj vlastný druhový antigén, spoločný pre všetkých ľudí, myši majú svoj vlastný druhový antigén pre myši atď. Na povrchu každej bunky musí byť prítomný špecifický a individuálny antigén.

    Špecifický antigén používajú bunky imunitného systému na rozpoznanie „priateľa alebo nepriateľa“.

    Ako dochádza k rozpoznávaniu antigénu?

    Imunitná bunka sa viaže na podozrivú bunku a vykonáva identifikáciu presne pomocou individuálneho antigénu. V pamäti imunitnej bunky je „napísané“, ako vyzerá „vlastný antigén“. Ak sa teda antigén podozrivej bunky zhoduje s popisom „jeho vlastný antigén“, znamená to, že táto bunka jeho vlastného organizmu nepredstavuje žiadne nebezpečenstvo. Potom sa imunitná bunka „rozviaže“ a odíde. A ak sa antigén nezhoduje s popisom „vlastného“, potom imunitná bunka identifikuje túto bunku ako „cudziu“, a teda potenciálne nebezpečnú pre celý organizmus. V takom prípade sa imunitná bunka „nerozviaže“, ale začne ničiť nebezpečný predmet. Presnosť tohto imunologického rozpoznávania je úžasná - 99,97%. Neexistujú prakticky žiadne chyby!

    Čo je protilátka, imunitný komplex?
    Čo je to protilátka?

    Protilátka je špeciálna molekula umiestnená na povrchu imunitnej bunky. Je to protilátka, ktorá sa viaže na antigény podozrivej bunky. Ďalej protilátka prenáša informácie do vnútra bunky, kde dochádza k rozpoznávaniu, a prijíma spätný signál dvoch typov, „našich“ alebo „mimozemšťanov“. Keď je signál „vlastný“, protilátka zničí väzbu s antigénom a uvoľní bunku.

    Čo je imunitný komplex?
    Na signál „mimozemšťan“ je situácia iná. Protilátka nenaruší väzbu s antigénom, ale naopak, vysielaním špecifických signálov spôsobí „zosilnenie“. Biologicky to znamená, že ďalšie protilátky umiestnené v inej časti bunky sa začnú pohybovať do oblasti, odkiaľ pochádza signál nebezpečenstva, a tiež vytvárajú väzbu medzi sebou a zachyteným antigénom. Nakoniec sa zdá, že antigén je obklopený zo všetkých strán a pevne pripojený. Tento komplex antigén + protilátka sa nazýva imunitný komplex. Od tohto okamihu začína využitie antigénu. Teraz nás však nezaujímajú podrobnosti procesu neutralizácie antigénu..

    Typy protilátok (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
    Protilátky sú proteínové štruktúry, ktoré majú chemický názov, ktorý sa používa ako synonymum pre slovo protilátka. Takže protilátky = imunoglobulíny.

    Existuje 5 typov imunoglobulínov (Ig), ktoré sa viažu na rôzne typy antigénov na rôznych miestach ľudského tela (napríklad na koži, slizniciach, v krvi atď.). To znamená, že protilátky majú deľbu práce. Tieto imunoglobulíny sa nazývajú písmená latinskej abecedy - A, M, G, D, E a označujú sa takto - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

    V diagnostike sa používa iba jeden typ protilátky, ktorý je pre detegovaný mikrób najšpecifickejší. To znamená, že k väzbe tohto typu protilátok na detegovaný antigén vždy dôjde. Najčastejšie sa používajú IgG a IgM.

    Práve tento princíp imunitnej odpovede (jedinečná presnosť a špecifickosť rozpoznávania určovaného biologického objektu) je základom enzymatického imunotestu. Vďaka vysokej presnosti protilátok pri rozpoznávaní antigénov je presnosť celej metódy enzýmového imunotestu tiež najvyššia..

    Enzymatická reakcia

    Aká je enzymatická reakcia? Čo je to afinita, substrát a reakčný produkt?
    Prejdime k úvahe o enzymatickej reakcii pri práci metódy enzýmovej imunotesty.

    Čo je to enzymatická reakcia?

    Enzymatická reakcia je chemická reakcia, pri ktorej sa jedna látka prevádza enzýmom na inú látku. Látka, na ktorú enzým pôsobí, sa nazýva substrát. A látka, ktorá sa získava v dôsledku pôsobenia enzýmu, sa nazýva reakčný produkt. Zvláštnosť enzymatickej reakcie je navyše taká, že určitý enzým pôsobí iba na určitý substrát. Táto vlastnosť enzýmu rozpoznať „svoj“ substrát sa nazýva afinita.

    Každý enzým teda vykonáva iba jednu špecifickú reakciu. V biologickom svete je známe veľké množstvo enzýmov, ako aj enzymatické reakcie. Pri enzýmovej imunoteste sa používa iba niekoľko enzymatických reakcií - nie viac ako 10, pričom sa zvolili také enzymatické reakcie, ktorých produktom sú zafarbené látky. Prečo by mali byť produkty enzymatickej reakcie zafarbené? Pretože na výpočet koncentrácie látky z farebného roztoku existuje jednoduchá chemická metóda - kolorimetria.

    Metóda kolorimetrie - podstata a princíp

    Kolorimetria využíva meranie hustoty farieb roztoku a koncentrácia látky sa počíta z hustoty farieb, zatiaľ čo špeciálny prístroj - kolorimeter - meria hustotu farieb roztoku. V kolorimetrii sú možné dva varianty závislosti hustoty farieb na koncentrácii látky - ide o priamu úmernú závislosť alebo nepriamo úmernú závislosť. Pri priamom proporčnom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým intenzívnejšia je farebná hustota roztoku. Pri nepriamo úmernom pomere platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým nižšia je farebná hustota roztoku. Po technickej stránke sa to stane takto: odoberie sa niekoľko roztokov so známou koncentráciou látky, zmeria sa hustota týchto roztokov, vynesie sa graf závislosti závislosti hustoty od farby (kalibračný graf).

    Ďalej sa zmeria farebná hustota roztoku, ktorého koncentrácia sa stanoví a podľa kalibračného grafu sa zistí hodnota koncentrácie zodpovedajúca úrovni nameranej farebnej hustoty roztoku. deje sa automaticky.

    V enzýmovej imunoteste sa najčastejšie používajú tieto enzýmy: peroxidáza, alkalická fosfatáza, avidín.

    Ako sa kombinujú imunologické a enzymatické reakcie v enzýmovom imunoteste? Teraz sa obrátime na zváženie skutočného imunotestu s enzýmom. Aké fázy zahŕňa a čo sa deje v priebehu týchto reakcií? Imunologický test môže byť priamy a nepriamy.

    Priamy enzýmovo viazaný imunosorbentný test - štádiá

    V priamom enzýmovo viazanom imunosorbentnom teste sa používajú protilátky proti detegovateľnému antigénu v kombinácii so špecifickou značkou. Táto špecifická značka je substrátom enzymatickej reakcie..

    Pripojte antigény k povrchu jamky a skombinujte antigén s protilátkou

    Ako funguje priamy enzýmový imunotest? Odoberá sa biologický materiál (krv, odreniny zo slizníc, škvrny) a umiestňuje sa do špeciálnych otvorov. Biologický materiál sa nechá v jamkách 15 až 30 minút, aby antigény mohli prilipnúť na povrch jamiek. Ďalej sa do týchto jamiek pridávajú protilátky proti detegovanému antigénu. To znamená, že detekciou antigénov, napríklad syfilisu, sa pridávajú protilátky proti antigénom syfilisu. Tieto protilátky sa získavajú priemyselne a laboratóriá kupujú hotové súpravy. Táto zmes testovaného materiálu a protilátok sa nechá istý čas (od 30 minút do 4 - 5 hodín), aby protilátky mohli nájsť a naviazať sa na „svoj“ antigén. vzorka antigénov, tým viac protilátok sa na ne naviaže.

    Odstránenie „extra“ protilátok

    Ako už bolo uvedené, protilátky sa tiež viažu na konkrétnu značku. Pretože sa protilátky pridávajú v nadbytku, nie všetky sa naviažu na antigény, a ak vo vzorke nie je vôbec žiadny antigén, potom sa žiadna protilátka neviaže na požadovaný antigén. Za účelom odstránenia „extra“ protilátok sa obsah jamiek jednoducho vyleje. V dôsledku toho sa odstránia všetky „extra“ protilátky a tie, ktoré sa naviazali na antigény, zostanú, pretože antigény sú „nalepené“ na povrch jamiek. Jamky sa niekoľkokrát prepláchnu špeciálnym roztokom, ktorý umožňuje vymyť všetky „extra“ protilátky.

    Enzymatická reakcia - tvorba zafarbenej zlúčeniny

    Potom sa začína druhá etapa - enzymatická reakcia. Roztok s enzýmom sa pridá do premytých jamiek a nechá sa 30 až 60 minút. Tento enzým má afinitu k látke (špecifické označenie), na ktorú sa viažu protilátky. Enzým uskutočňuje reakciu, v dôsledku ktorej sa táto špecifická značka (substrát) zmení na sfarbenú látku (produkt). Potom sa kolorimetricky zistí koncentrácia tejto zafarbenej látky. Pretože toto špecifické označenie je spojené s protilátkami, znamená to, že koncentrácia zafarbeného reakčného produktu sa rovná koncentrácii protilátok. A koncentrácia protilátok sa rovná koncentrácii antigénov. Na základe analýzy teda dostaneme odpoveď, aká je koncentrácia detekovaného mikróbu alebo hormónu.

    Takto prebieha priamy enzýmový imunotest. Dnes sa však častejšie používa test nepriameho enzýmu viazaného na imunosorbent, pretože citlivosť a presnosť nepriameho testu je vyššia ako priameho testu. Prejdime teda k nepriamemu enzýmovému imunotestu.

    Nepriamy enzýmový imunotest - štádiá

    Pri nepriamom enzýmovom imunoteste existujú dva stupne. V prvom štádiu sa používajú neznačené protilátky na detegované antigény a v druhom stupni sa používajú označené protilátky k prvým neznačeným protilátkam. To znamená, že nejde o priamu väzbu protilátky na antigén, ale o dvojitú kontrolu: väzbu protilátok na antigén, po ktorej nasleduje väzba druhých protilátok na komplex protilátka + antigén. Protilátky pre prvé štádium sú spravidla myšie a pre druhé kozie.

    Fixácia antigénov na povrchu jamky a väzba antigénu na neznačenú protilátku
    Rovnako ako pre priamy enzýmový imunotest sa odoberá biologický materiál - krv, odreniny, škvrny. Biologický materiál, ktorý sa má študovať, sa zavedie do jamiek a nechá sa 15 až 30 minút prilipnúť antigény k povrchu jamiek. Potom sa do jamiek zavedú neznačené protilátky proti antigénom a nechajú sa na určitý čas (1 až 5 hodín), aby sa protilátky naviazali na „svoje“ antigény a vytvorili imunitný komplex (prvý stupeň). Potom odstráňte „extra“ nenaviazané protilátky vyliatím obsahu jamiek. Prepláchnite špeciálnym roztokom, aby sa úplne odstránili všetky nenaviazané protilátky.

    Väzba značenej protilátky na komplex antigén + neznačená protilátka
    Potom vezmite druhé protilátky - označené, pridajte do jamiek a opäť nechajte nejaký čas - 15 - 30 minút (druhá fáza). Počas tejto doby sa značené protilátky viažu na prvý - neoznačený a tvoria komplex - protilátka + protilátka + antigén. Značené aj neznačené protilátky sa však do jamiek pridávajú v nadbytku. Preto je potrebné opäť odstrániť „extra“, už označené protilátky, ktoré sa neviazali na neoznačené protilátky. Za týmto účelom zopakujte postup nalievania obsahu jamiek a opláchnutie špeciálnym roztokom.

    Enzymatická reakcia - tvorba zafarbenej zlúčeniny
    Potom sa zavedie enzým, ktorý uskutoční reakciu transformácie „štítku“ na sfarbenú látku. Farba sa vyvíja do 5-30 minút. Potom sa uskutoční kolorimetria a vypočíta sa koncentrácia zafarbenej látky. Pretože koncentrácia zafarbenej látky sa rovná koncentrácii označených protilátok a koncentrácia označených protilátok sa rovná koncentrácii neznačených protilátok, ktorá sa zase rovná koncentrácii antigénu. Takto získame koncentráciu detegovaného antigénu.
    Táto dvojitá kontrola vo forme použitia dvoch typov protilátok umožnila zvýšiť citlivosť a špecifickosť metódy enzýmového imunotestu. Napriek predĺženiu času analýzy a zahrnutiu ďalších etáp sú tieto straty kompenzované presnosťou výsledku. Z tohto dôvodu je v súčasnosti drvivou väčšinou metód enzýmovej imunotestu nepriama enzýmová imunotest.


    Aké choroby sa zisťujú pomocou enzýmovej imunotesty?

    Poďme ďalej zvážiť, aké choroby a aké biologicky aktívne látky sa zisťujú metódou enzýmového imunotestu. Látky zistené metódou ELISA sú uvedené v tabuľke.

    Pre Viac Informácií O Cukrovke